[發(fā)明專利]一種從黑果枸杞果實中分離制備花色苷單體的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310658409.8
• 申請日: 2013-12-09
• 公開（公告）號: CN103626814A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 索有瑞;胡娜;丁晨旭;張秋龍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院西北高原生物研究所
• 主分類號: C07H17/065
• 分類號: C07H17/065;C07H1/08;C09B61/00
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

1.一種從黑果枸杞果實中分離制備花色苷單體的方法，包括以下步驟：

⑴原料預(yù)處理：將黑果枸杞果實挑選去雜，用水沖洗，洗去表面浮土，得到處理后的黑果枸杞果實；

⑵配制體積濃度為2%甲酸甲醇溶液：將200?mL甲酸與9800?mL甲醇混合均勻即得；

⑶將所述步驟⑵所得的甲酸甲醇溶液加入到所述黑果枸杞果實中，在室溫避光狀態(tài)下按1?g：1?~5mL的比例進(jìn)行常溫浸提，提取次數(shù)為1~3次，每次12~24?h，合并得到提取液；

⑷所述提取液用濾紙除去不溶物、蛋白質(zhì)、多糖后，得到濾液，該濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在40~50℃進(jìn)行真空蒸發(fā)濃縮至膏狀，得到黑果枸杞花色苷浸膏，并回收甲醇；

⑸大孔吸附樹脂的處理：將D-101大孔吸附樹脂用體積濃度為95%?的甲醇浸泡?24?小時，然后用體積濃度為95%?的甲醇進(jìn)行洗滌，再用去離子水清洗；將該大孔吸附樹脂緩慢裝入樹脂柱中，再用去離子水沖洗至柱中顆粒干凈，不再沉降為止，即得處理后的大孔吸附樹脂；

⑹將所述黑果枸杞花色苷浸膏用體積濃度為2?%的甲酸復(fù)溶后上所述處理后的大孔吸附樹脂；上樣后先以4~6倍柱體積的蒸餾水沖柱，然后再以3~6倍柱體積的甲醇沖柱，將花色苷類化合物解吸附，收集流出液；

⑺所述流出液經(jīng)減壓濃縮后得到花色苷粗品，同時回收甲醇；

⑻將所述花色苷粗品注入高效半制備色譜柱中，在柱溫為25~40℃、流速為15~25?mL/min、進(jìn)樣量為200~600?mg、檢測波長為525nm的條件下進(jìn)行半制備色譜分離，根據(jù)出峰時間依次收集純度較低的單體矮牽牛素-3,5-O-diglucosides,?矮牽牛-3-O-rutinoside?(trans-p-coumaroyl)-5-O-glucosides；然后采用高效液相色譜系統(tǒng)在柱溫為25~40℃、流速為0.6~1.0?mL/min、進(jìn)樣量為10?ul、檢測波長為525nm的條件下進(jìn)行檢測，當(dāng)樣品純度低于90%時，再次采用高效半制備色譜柱進(jìn)行二次分離，即得純度≥90%的花色苷單體；最后，所述花色苷單體于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上依次經(jīng)減壓濃縮、真空冷凍干燥至恒重，即得花色苷單體成品。

2.如權(quán)利要求1所述的一種從黑果枸杞果實中分離制備花色苷單體的方法，其特征在于：所述步驟⑺和步驟⑻中減壓濃縮的條件均是指40~50℃水浴，轉(zhuǎn)速45~55?r.p.m，真空泵壓力為0.06~0.08MPa。

3.如權(quán)利要求1所述的一種從黑果枸杞果實中分離制備花色苷單體的方法，其特征在于：所述步驟⑻中真空冷凍干燥的條件是指冷肼溫度為-45~-55?℃，真空度為10~15?Pa。

4.如權(quán)利要求1所述的一種從黑果枸杞果實中分離制備花色苷單體的方法，其特征在于：所述步驟⑻中高效液相色譜分離的條件是指流動相分別為A相：A：體積濃度為10%的甲酸溶液中含有體積濃度為0.1%的三氟乙酸，B相：含有體積濃度為15%的甲醇的乙腈溶液；梯度洗脫程序為：0~30?min，3?%?~?11.5?%?B相，線性梯度；30~40?min，11.5?%B相，等度洗脫；40~60?min，11.5?%?~?15.5?%?B相，線性梯度；60~70?min，15.5?%?~16?%?B相，線性梯度；70~80?min，16?%?~?23?%?B相，線性梯度；80~100?min，23?%~?3?%?B相，線性梯度。

5.如權(quán)利要求1所述的一種從黑果枸杞果實中分離制備花色苷單體的方法，其特征在于：所述步驟⑻中半制備色譜分離的條件是指流動相分別為A相：含有體積濃度為50?%的乙腈的甲醇，B相：體積濃度為5?%甲酸的水溶液；一次純化程序為：0~25?min，85?%?~?65?%A相，線性梯度；25~35?min，65?%?~63?%A相，線性洗脫；35~50?min，63?%~55?%A相，線性洗脫；50~70?min，55?%?~85?%A相，線性洗脫；二次純化程序為：流動相分別為A相：50?%甲醇水溶液，B相：5?%甲酸溶液，進(jìn)行等度洗脫。