[發明專利]一種獲得植物高花青素含量毛狀根的方法

有效

• 申請號: 201310656046.4
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號: CN103695460A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 劉寶龍;張懷剛;劉登才;張波;陳文杰;沈裕虎;魏樂
• 申請（專利權）人: 中國科學院西北高原生物研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/06
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

1.一種獲得植物高花青素含量毛狀根的方法，其特征在于：它獲得的步驟如下：

(一)、設計包含AttB1adapter和AttB2adapter的引物，將植物中調控花青素合成代謝的MYB基因AmROS1和bHLH基因AmDEL通過Gateway克隆的BP反應連接到載體pDONR207；然后利用Gateway克隆的LR反應將AmROS1和AmDEL分別連接到載體PJAM1502(卡那霉素抗性)和載體pK7WG2D(壯觀霉素抗性)中獲得PJAM1502：：AmROS1和pK7WG2D：：AmDEL；

(二)、利用電轉化的方法將PJAM1502：：AmROS1和pK7WG2D：：AmDEL轉化到發根農桿菌Ar1193中，通過利福平、卡那霉素和壯觀霉素抗生素篩選，獲得包含PJAM1502：：AmROS1和pK7WG2D：：AmDEL的發根農桿菌；

(三)、煙草在無菌培養基上發芽生長19天，在超凈臺中將煙草葉片剪成小方塊，侵染20分鐘，共培養2天后，在MS固體培養基(250mg/L塞福隆，50mg/L卡那霉素)培養20天后，在煙草的傷口處出現紫色毛狀根；

(四)、將毛狀根放入三角瓶后，加入MS液體培養基(250mg/L塞福隆，50mg/L卡那霉素)，震蕩培養28天后，測定毛狀根中花青素含量為132mg/100g，接近水果藍莓中的花青素含量；

(五)、質譜鑒定毛狀根中含有3種花青素類化合物，與煙草花中花青素種類與結構相同。

2.根據權利要求1所述的一種獲得植物高花青素含量毛狀根的方法，其特征在于：將調控花青素合成代謝的MYB基因和bHLH基因轉化到同一個發根農桿菌中，侵染植物的組織器官，獲得高花青素含量的毛狀根。