[發明專利]抑制血管內皮生長因子受體基因表達的脫氧核酶

無效

• 申請號: 201310655835.6
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號: CN103627709A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 孫侖泉;楊力芳
• 申請（專利權）人: 孫侖泉;楊力芳
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京萬象新悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11360
• 代理人: 李稚婷

技術領域

本發明涉及一類靶向腫瘤血管新生血管基因的脫氧核酶，具體地說涉及一類可抑制血管內皮生長因子受體VEGFR1基因表達，抑制腫瘤新生血管生成和腫瘤生長的脫氧核酶。

背景技術

新生血管生成是指從既存的脈管系統上經過多步驟、在多因素的作用下形成的新的血管系統，是促血管形成因子和血管生成抑制因子相互調控的結果。正常情況下二者處于平衡狀態，一旦此平衡打破就會激活血管系統，促進血管生成或抑制血管系統。正常的血管生成只在某些特定的生理過程中出現，如胚胎發育、傷口愈合、月經周期等，而異常的血管生成則是腫瘤、免疫系統疾病、動脈粥樣硬化等疾病的病理表現之一。

腫瘤血管不同于正常組織的血管[1]，生長不具可控性，結構異常，分布紊亂，缺乏正常的微循環的功能，但仍具旺盛的提供營養和氧氣、排泄廢物的能力，是腫瘤生長和轉移的病理基礎，在腫瘤發生發展中具有重要地位。目前，腫瘤血管已成為腫瘤分子靶向治療中最重要的靶點。自Folkman首次提出靶向血管生成可以抑制腫瘤生長成為一種治療方式以來[2]，大量的實驗研究與臨床實驗證實抑制腫瘤介導的血管生成可以有效地抑制腫瘤的生長和轉移[3-5]，已有數十個靶向血管的抗癌藥物進入臨床，他們與放化療的聯合應用顯示出良好的應用前景。針對腫瘤血管的靶向治療主要分為兩類[6]，一是抗血管新生制劑（anti-angiogenic?inhibitors,AI），即抑制腫瘤血管的生成，主要作用于腫瘤的早期治療階段或者用來預防有轉移潛能的腫瘤治療；二是腫瘤血管阻斷制劑(vascular-disrupting?agents，VDA)，即破壞已生成的血管，利用該制劑特異性結合腫瘤血管的配體或者選擇性破壞異常的血管相關因子，主要用來治療已經形成的體積較大腫瘤。基于AI和VDA的不同作用特點，兩者聯用可以有效提高療效[7]。

在眾多的促血管生成因子中，血管內皮生長因子（VEGF）是最早發現的作用最強的促血管生長和增加血管通透性的因子，越來越多的研究顯示[8]，血管內皮生長因子家族(vascular?endothelial?growth?factor?family，VEGFs)通路在腫瘤的生長和轉移中起著重要作用。VEGF通過與血管內皮生長因子受體（VEGFR）的結合使VEGFR二聚體化，形成同源二聚體或異源二聚體，磷酸化的酪氨酸殘基可以調控激酶的活力，參與內皮細胞的分化、增殖和遷移，也可為胞漿中的信號分子提供結合結構域，參與下一級的細胞信號傳導[9]。

VEGFR-l屬三個酪氨酸蛋白激酶受體家族之一[10]，分子量約為180kDa，其蛋白質結構分為胞內區、跨膜區和胞外區三個部分，其中胞外區負責與配體結合，具有7個免疫球蛋白樣袢，配體結合域位于氨基端3個loop內口。在人類，編碼VEGFR-l的基因位于染色體13q12-q13，基因全長7680bp，編碼1338個氨基酸。VEGFR-1是VEGF的三個酪氨酸激酶受體之一，是結合VEGF-A的細胞膜錨定的酪氨酸激酶受體，也是結合VEGF-B和P1GF的唯一酪氨酸激酶受體[11]。VEGFR-1介導的信號通路，尤其是與配體PIGF結合引起的信號主要介導病理性血管的形成。大量研究發現該激酶域對于單核巨噬細胞調節血管的滲透性以及PIGF誘導的血管新生是必不可少的，靶向VEGFR-1的小分子抑制劑均能有效抑制腫瘤的血管新生[12]。

VEGFR-1陽性的骨髓造血祖細胞能調節VEGFR-2陽性內皮祖細胞的招募和外滲，促進VEGFR-2進入血管參與新生血管的形成，為腫瘤細胞的傳播共同建立轉移微環境[13]。選擇性抑制VEGFR-1消除了腫瘤微小轉移龕的形成，從而降低了腫瘤的微轉移。綜上所述，VEGFR-1信號通路在炎癥和轉移、調節和促進腫瘤血管生成方面有至關重要的作用，以VEGFR-l為靶點的抗腫瘤治療是一個應用前景可觀的領域。

脫氧核酶是利用體外分子進化技術獲得的一種具有催化功能的短片段單鏈DNA，具有高效的催化活性和結構識別能力。脫氧核酶將高效的催化降解能力與反義的靶向識別能力結合，能夠特異地針對靶標從mRNA水平關閉靶基因，從而調控目標蛋白質的表達，是一種高效特異的靶向基因治療的新策略[14]。脫氧核酶獨特的化學本質為脫氧寡核苷酸，性質相對穩定；分子量小，結構相對簡單，對底物的趨近性好；催化效率及特異性高，副作用低；靶位點選擇的限制更少；易于合成，價格低廉。利用脫氧核酶靶向VEGFR-1將提供一種新型抗腫瘤血管生成并抑制腫瘤生長的制劑。

參考文獻