[發(fā)明專利]一種基于EDC反應(yīng)制備含氨基小分子物質(zhì)與蛋白偶聯(lián)物最佳條件的篩選方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310654333.1
• 申請(qǐng)日: 2013-12-03
• 公開（公告）號(hào): CN104672297A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張峰;王曉偉;鐘睿博
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K1/113
• 分類號(hào): C07K1/113
• 代理公司: 無(wú)
• 代理人: 無(wú)

1.一種基于EDC反應(yīng)制備含氨基小分子物質(zhì)與蛋白偶聯(lián)物最佳條件的篩選方法，其特征在于：利用本方法可以快速找到利用利用EDC(中文名稱：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽)高效偶聯(lián)蛋白質(zhì)分子(含有自由的羧基：-COOH)與小分子物質(zhì)(含有伯胺基團(tuán)：-NH₂)的最佳反應(yīng)條件：EDC與蛋白質(zhì)以及小分子物質(zhì)的分子數(shù)(物質(zhì)的量之比)，是一種簡(jiǎn)捷、高效、微量、用來(lái)篩選最佳實(shí)驗(yàn)條件的科學(xué)方法。?

2.如下詳細(xì)描述基于EDC反應(yīng)制備含氨基小分子物質(zhì)與蛋白偶聯(lián)物最佳條件的篩選方法：?

1)取一排PCR管并編號(hào)1-12，向這12個(gè)管中分別加入10μL去離子水。?

2)將10μL新配制的EDC水溶液(768mmol／L)加入到1號(hào)管中，移液槍混勻，從1號(hào)管中抽取10μL再加入到2號(hào)管中，移液槍混勻，再抽取10μL加入到3號(hào)管中，混勻后再抽取10μL加入到4號(hào)管中，混勻后再抽取10μL加入到5號(hào)管中，以此類推，直到從10號(hào)管混勻后抽取10μL再加入到11號(hào)管中，混勻后抽取10μL，棄之。

3)往1-12號(hào)管中分別加入10μL蛋白質(zhì)(6μmol／L)和10μL小分子(3mmol／L)，室溫下反應(yīng)3小時(shí)。?

4)利用常規(guī)電泳法檢測(cè)如上樣品，通常采用10％的SDS-PAGE膠在100V電壓下跑膠2小時(shí)，考馬斯亮藍(lán)染色、脫色、拍照進(jìn)行條帶滯后對(duì)比：可以迅速篩選出偶聯(lián)最佳條件之EDC分子用量(用量太多會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)自身的交聯(lián)，太少又偶聯(lián)效率太低)。?

5)將EDC與小分子樣品交換，重復(fù)以上1)-4)過(guò)程：其中需要將4)中找到的最佳EDC量應(yīng)用于上述實(shí)驗(yàn)，把持EDC與蛋白的分子比例恒定，變換小分子的物質(zhì)的量(分子數(shù)：從1號(hào)到11號(hào)管依次減半，12號(hào)管是對(duì)照管)。?

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于EDC反應(yīng)制備含氨基小分子物質(zhì)與蛋白偶聯(lián)物最佳條件的篩選方法流程，其特征在于，步驟2)中從1號(hào)管到11號(hào)管中EDC或者小分子的濃度依次稀釋兩倍。?

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于EDC反應(yīng)制備含氨基小分子物質(zhì)和蛋白偶聯(lián)物最佳條件的篩選方法流程，其特征在于，步驟2)中，在手套箱中稱取EDC，應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，且在配好之后迅速使用。?