[發(fā)明專利]一種五味子有機(jī)酸分析方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310654107.3
• 申請(qǐng)日: 2013-12-05
• 公開（公告）號(hào): CN103604890A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 殷放宙;殷武;李林;陸兔林;蔡寶昌;李偉東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥飲片的質(zhì)量控制領(lǐng)域，具體涉及五味子飲片有機(jī)酸的分析方法及其中代表性物質(zhì)4-氧代戊酸的質(zhì)量控制方法。

背景技術(shù)

五味子是木蘭科五味子Schisandra?chinese(Turcz.)Baill.的干燥成熟的果實(shí)，具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心之效。臨床用于久嗽虛喘，夢(mèng)遺滑精，遺尿尿頻，久瀉不止，自汗，盜汗，津傷口渴，短氣脈虛，內(nèi)熱消渴，心悸失眠。《中國藥典》2010版收載的五味子的炮制品種是五味子及醋蒸五味子，在五味子的臨床應(yīng)用上亦以此兩種為主，醋蒸后酸澀作用增強(qiáng)，澀精止瀉作用增強(qiáng)。五味子中主要成分包括木脂素、揮發(fā)油、有機(jī)酸類等。其中，木脂素的成分主要為聯(lián)苯環(huán)辛烯型木脂素，現(xiàn)代研究多認(rèn)為其為五味子中最主要的生物活性成分，具有保肝、抗氧化等藥理作用，以五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素等為代表，揮以油主要以α-蒎烯，莰烯，β-蒎烯，月桂烯,α-萜品烯，檸檬烯，γ-萜品烯等為主，而有機(jī)酸多以小分子有機(jī)酸為主，如枸櫞酸、蘋果酸、酒石酸、琥珀酸等。

目前藥典及各研究報(bào)道主要集中在對(duì)其所含木脂素成分的研究，有較多的文獻(xiàn)對(duì)五味子炮制前后的木脂素含量進(jìn)行了分析，其結(jié)果說明五味子經(jīng)醋蒸后木脂素含量稍有增加，但基本無顯著性差異，現(xiàn)版藥典中關(guān)于五味子飲片及醋五味子飲片的質(zhì)量控制均只以木脂素代表性成分五味子醇甲作為其指標(biāo)性成分，且限度相同。但五味子在醋蒸前后的藥效作用及臨床運(yùn)用有較大的差異，且五味子醋蒸后主要體現(xiàn)的是止瀉作用增強(qiáng)，尚無其增強(qiáng)止瀉的相關(guān)成分的文獻(xiàn)報(bào)道。因此對(duì)五味子炮制品進(jìn)行全面的質(zhì)量評(píng)價(jià)，特別是選擇與藥效作用相關(guān)成分并確定其限度，才能更加有效地保證五味子炮制品的質(zhì)量，以保證其在臨床上發(fā)揮最大的功效。

作為收斂固澀藥的代表，五味子中的有機(jī)酸成分亦不容忽視。五味子的藥效作用應(yīng)是多成分的綜合作用，不僅僅體現(xiàn)在其主要的木脂素類成分，因此對(duì)五味子中有機(jī)酸的化學(xué)成分、藥理作用亦應(yīng)深入研究，特別是炮制前后在有機(jī)酸上的差異。文獻(xiàn)上對(duì)五味子有機(jī)酸的分析主要采取的是電位滴定法測(cè)定其所含的總有機(jī)酸含量，而對(duì)其具體的有機(jī)酸成分報(bào)道較少，特別是醋蒸后有機(jī)酸成分的變化無文獻(xiàn)報(bào)道。

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有研究的空白，采用新的手段對(duì)五味子中的有機(jī)酸進(jìn)行了質(zhì)量評(píng)價(jià)，特別是對(duì)生五味子及醋五味子有機(jī)酸采取了直接甲酯化的方法，并采用氣質(zhì)聯(lián)用的方法進(jìn)行了全面的分析，研究過程中發(fā)現(xiàn)五味子醋蒸后4-氧代戊酸的含量明顯增加，通過藥理實(shí)驗(yàn)證明4-氧代戊酸具有止瀉的作用，測(cè)定了其中4-氧代戊酸的含量并規(guī)定了限度，解決了五味子炮制品有機(jī)酸質(zhì)量控制的難題，充分體現(xiàn)了與藥效相關(guān)的指標(biāo)來控制飲片質(zhì)量的要求，提高后的有機(jī)酸質(zhì)量檢測(cè)能更好地控制五味子炮制品中的有機(jī)酸的質(zhì)量，本方法具有較強(qiáng)的專屬性和良好的重現(xiàn)性。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種五味子有機(jī)酸分析檢測(cè)的方法，并建立五味子炮制品中4-氧代戊酸的含量測(cè)定方法。為了達(dá)到這個(gè)目的，采用如下技術(shù)方案：

一種五味子炮制品有機(jī)酸的分析方法，包括以下步驟：

（1）樣品制備方法：取生五味子（60目）、醋五味子（60目）各約0.2g，精密稱定，置具塞試管中，精密加入10%的硫酸甲醇1.0mL于恒溫振蕩器中35℃振蕩24h（150r/min）后，精密加入飽和NaCl溶液2mL及乙醚-氯仿（2:1）混合液2mL，混旋3min，離心5min(3000r/min)，取上清液，加適量無水硫酸鈉，干燥，即得。

（2）GC-M?S分析條件：質(zhì)譜條件：EI離子源；電子能量70eV；離子源溫度230℃；四級(jí)桿溫度150℃；檢測(cè)電壓1235V；溶劑延遲3.2min。色譜條件：HP-5色譜柱(30m×250μm，0.5μm)；氦氣（99.999%）為載氣，流速1.0mL/min；柱前壓0.171MPa；進(jìn)樣口溫度250℃；分流進(jìn)樣（分流比15:1）；程序升溫：初始溫度40℃，以5℃/min的速率升至260℃（恒溫10min）。

采用上述方法分析五味子炮制品有機(jī)酸，結(jié)果表明：五味子醋蒸后，4-氧代戊酸在生五味子飲片中其相對(duì)含量為0.692%，而在醋五味子飲片中相對(duì)含量達(dá)到1.653%，醋五味子中4-氧代戊酸相對(duì)含量是生五味子中的2.38倍。

本發(fā)明還公開一種利用上述有機(jī)酸分析方法的4-氧代戊酸的含量測(cè)定方法，該方法包括以下步驟：

（1）對(duì)照品溶液的制備：分別精密吸取4-氧代戊酸對(duì)照品適量置5mL量瓶中，各加10%硫酸甲醇溶液溶解并定容至刻度。