[發(fā)明專利]乙型肝炎表面抗原測定試劑盒以及檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310652173.7
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號(hào): CN103630531A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳秀發(fā);胡慶鋒;常立峻;徐海偉;李勇
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州長光華醫(yī)生物醫(yī)學(xué)工程有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/76
• 分類號(hào): G01N21/76
• 代理公司: 南京縱橫知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及乙型肝炎診斷試劑盒，具有設(shè)計(jì)基于雙抗原化學(xué)發(fā)光原理的乙型肝炎表面抗原測定試劑盒及檢測方法。

背景技術(shù)

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的一種傳染性疾病。HBV可以通過血液和體液直接傳播，常見的傳播方式包括輸血、注射、傷口接觸、母嬰傳播等；常見的臨床癥狀有不適、發(fā)熱、黃疸、無癥狀肝炎、暴發(fā)性肝炎以及慢性肝炎等，慢性感染易發(fā)展成為肝癌，因此，檢測乙型肝炎的工作至關(guān)重要。

目前，常用的檢測方法是免疫學(xué)檢測，免疫學(xué)檢測時(shí)基于抗原和抗體的特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測的一種手段，其可以利用同位素、酶、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等對(duì)被檢測信號(hào)進(jìn)行放大和顯示，因此常被用于檢測蛋白質(zhì)，激素等微量生物活性物質(zhì)。免疫學(xué)檢測經(jīng)理了放射免疫檢測、酶聯(lián)免疫檢測以及光生物學(xué)標(biāo)記免疫檢測技術(shù)三個(gè)階段，使免疫學(xué)檢測向著敏感性、準(zhǔn)確性以及操作簡捷性的方向發(fā)展。

化學(xué)發(fā)光免疫分析是近十年來在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析技術(shù)。檢測原理是以發(fā)光物質(zhì)作為信號(hào)放大系統(tǒng)并借助其發(fā)光強(qiáng)度直接測定免疫結(jié)合。該方法靈敏度高、檢測范圍寬，是免疫學(xué)檢測重要的發(fā)展方向。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種靈敏度高、誤差小、安全快速檢測的乙型肝炎表面抗原測定試劑盒及檢測方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種乙型肝炎表面抗原測定試劑盒，包括試劑M、試劑R1、試劑R2以及校準(zhǔn)品，所述試劑M中組分包括親和素包被磁微粒，所述親和素包被磁微粒經(jīng)診斷試劑防腐劑處理；所述試劑R1中的組分包括生物素化Anti-HBs、磷酸鹽緩沖液以及診斷試劑防腐劑；所述試劑R2中的組分包括吖啶酯標(biāo)記的Anti-HBs、磷酸鹽緩沖液以及診斷試劑防腐劑；所述對(duì)照組包括人源性乙肝表面抗原、新生牛血清以及診斷試劑防腐劑。

本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，所述親和素包被磁微粒的親和素為鏈霉親和素、中性親和素或類親和素，所述親和素包被磁微粒中的磁微粒是以四氧化三鐵為內(nèi)核表面包裹活性基團(tuán)的聚合物，所述磁微粒的直徑為1.5um。

本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，試劑R1和試劑R2中所述磷酸緩沖液的濃度均為0.01M，pH值為7.4。

本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，所述診斷試劑防腐劑為0.1%的Proclin300防腐劑。

本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，所述試劑R1的量為6ml，所述試劑R2的量為12ml，所述試劑M的量為3ml。

本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，所述校準(zhǔn)品包括校準(zhǔn)品1和校準(zhǔn)品2兩組，所述校準(zhǔn)品1的量為0.5ml，HBsAg濃度為0.1IU/ml，所述校準(zhǔn)品2的量為0.5ml，HBsAg濃度為30IU/ml。

本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，一種使用該乙型肝炎表面抗原測定試劑盒的檢測方法，包括以下幾步：

（1）在將待測樣品和含有生物素化Anti-HBs的試劑R1進(jìn)行反應(yīng)，形成含有抗原-抗體復(fù)合體的反應(yīng)液1；

（2）在反應(yīng)液1中加入含有親和素包被磁微粒的試劑M，反應(yīng)液1中的復(fù)合體在生物素和親和素的相互作用下形成固相，得到了反應(yīng)液2；

（3）反應(yīng)液2置于一個(gè)磁場內(nèi)，檢測其中的磁微粒將被吸附，通過洗滌液洗滌，將未結(jié)合物沖洗除去，得到反應(yīng)液3；

（4）在反應(yīng)液3中加入含有吖啶酯標(biāo)記的Anti-HBs的試劑R2，吖啶酯標(biāo)記的Anti-HBs與磁微粒上的HBsAg復(fù)合物反應(yīng)，得到反應(yīng)液4；

（5）將反應(yīng)液4置于化學(xué)發(fā)光測定儀上進(jìn)行檢測，在磁場中磁微粒將被吸附，通過洗滌液洗滌，將未結(jié)合物沖洗除去；然后，注入化學(xué)發(fā)光激發(fā)液1及化學(xué)發(fā)光激發(fā)液2，檢測其化學(xué)發(fā)光光子強(qiáng)度；產(chǎn)生的光強(qiáng)度與樣本內(nèi)乙型肝炎表面抗原濃度成正比。

本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，所述化學(xué)發(fā)光激發(fā)液1中含有過氧化氫，所述化學(xué)發(fā)光激發(fā)液2中含有氫氧化鈉，所述洗滌液含有磷酸鹽緩沖液。

本發(fā)明的解決了現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，具有以下有益效果：

1.本發(fā)明涉及的乙型肝炎表面抗原測定試劑盒，制備簡單，使用方便，易于儲(chǔ)存，可用于定量測定人體血清（血漿）中乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的濃度，HBsAg檢測可用于輔助診斷HBV感染和預(yù)防HBV通過血制品傳播，也可用于急性、慢性乙肝患者的病程監(jiān)測。使用該試劑盒來的檢測方法是基于雙抗原化學(xué)發(fā)光原理，該方法靈敏度高、誤差小、安全快速。

具體實(shí)施方式