[發明專利]一種可穩定遺傳的抗蟲轉基因玉米的構建方法無效
| 申請號： | 201310651763.8 | 申請日： | 2013-12-05 |
| 公開（公告）號： | CN103667340A | 公開（公告）日： | 2014-03-26 |
| 發明（設計）人： | 邱法展;張祖新;杜鄧襄;張小波;張方東;鄭用璉 | 申請（專利權）人： | 華中農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;A01H5/00 |
| 代理公司： | 武漢宇晨專利事務所 42001 | 代理人： | 王敏鋒 |
| 地址： | 430070 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 穩定 遺傳 轉基因 玉米 構建 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種可穩定遺傳的抗蟲轉基因玉米的構建方法，其步驟如下：?
（1）按照常規方案制備胚性玉米愈傷組織；
（2）轉基因載體的構建：
pCAMBIA3300載體用BamH?I和Hind?III進行雙酶切消化并重新連接cry1C*基因獲得目的載體；然后使用限制性內切酶samI切下載體上的潮霉素抗性基因，使用連接酶將帶有samI酶接頭的草丁膦抗性基因bar基因替換，獲得轉基因載體；
（3）利用基因槍介導轉化的方法，將包裹有目的基因載體的金粉轟擊高滲培養后的胚性愈傷組織；基因槍轟擊后恢復培養7-10天后轉入含有2mg/L雙丙氨膦的篩選培養基篩選培養2-3輪，每輪20-30天；篩選后將具有除草劑抗性的愈傷組織轉到分化培養基分化成苗，得到一種可穩定遺傳的抗蟲轉基因玉米單株；
所述的cry1C*基因序列為SEQ?ID?NO.1所示。
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