[發明專利]一種快速定量檢測氧化樂果殘留的方法

在審

• 申請號: 201310650492.4
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號: CN104596968A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 王繼雯;陳國參;岳丹丹;李冠杰;張曉梅;劉瑩瑩;楊文玲;甄靜;寧萌;賈彬
• 申請（專利權）人: 河南省科學院生物研究所有限責任公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 張曉萍

技術領域

本發明屬于藥物檢測技術領域，具體涉及一種快速定量檢測氧化樂果殘留的方法。?

背景技術

近年來，有機磷農藥（organophosphorus?pesticides，Ops）由于具有高效和使用成本低等特點，在世界農業中起著極其重要的作用，是主要的殺蟲劑之一。有機磷農藥屬于中、高毒性農藥，具有內吸毒性，在環境中殘留量大，大部分難降解，在保護農作物的同時，也造成環境的嚴重污染，并且直接或間接危及人體健康。氧化樂果屬于有機磷農藥中應用最廣、最多的一種，與其他有機磷農藥一樣其優點和危害同時并存：氧化樂果采用高濃度灌根施藥即導致土壤污染，污染的土壤再經雨水沖刷流入河水中，導致水污染；在防治地面作物害蟲時，通常采用涂莖或噴灑的方法施藥，藥物被植株的莖、葉吸進植株體內，在殺滅害蟲的同時造成氧化樂果在植物體內大量殘留，通過食物鏈產生毒害作用，及時發現和檢測氧化樂果殘留具有十分重要的實際意義。近年來，對有機磷農藥殘留檢測的研究越來越多，手段與方法也不斷更新，常見的方法主要有波譜法、色譜法和酶抑制法。波譜法靈敏度不高，一般只做為定性的鑒別方法用于粗選；色譜法是目前檢測有機磷農藥的最主要檢測方法，又分為氣相色譜法、薄層色譜法和高效液相色譜法三類，氣相色譜法是進入20?世紀50?年代以后，在柱層析的基礎上發展起來的一種新型的儀器分析方法，是目前應用最廣的分析方法；薄層色譜法受分析的靈敏度、定量困難的制約，應用較少；液相色譜法與氣相色譜法相比，不受樣品的揮發度和熱穩定性的限制，適合于大分子、不穩定的化合物的分析，但其在速度、靈敏度和便捷方面不如氣相色譜法，并且耗費要高出很多。氣相色譜法在分析有機磷農藥時，是利用不同的有機磷農藥在固定相中分離，經不同的檢測器檢測掃描繪出氣相色譜圖，通過保留時間來定性，通過峰高或峰面積與標準曲線對照來定量，氣相色譜儀的使用條件要求高，對使用環境和操作條件要求嚴格，使用人員要經過專門的培訓，操作繁瑣，前左右理比較麻煩，耗時長，沒有特定的設備和條件無法實現快速、定量檢測。酶抑制法是利用有機磷農藥有抑制膽堿酯酶活性的作用，從而影響乙酰膽堿或丁酰膽堿在膽堿酯酶作用下產生膽堿、乙酸或丁酸的反應，使分解產物乙酸或丁酸減少，由此根據指示劑顏色或反應液pH?值的變化，達到檢測有機磷農藥的目的。AOAC?在1964?年最早公布了該方法檢測有機磷農藥；美國的中西部研究院(?MidwestResearch?Institute)于1985年報道的農藥檢測酶片(?Enzyme?Ticket)，可測出水中0.?1～10?ng?/L有機磷(OPS)或氨基甲酸酯類農藥；我國農業部環境保護科研監測所李治祥等1989年也做了類似報道。2002年新頒布的中華人民共和國國家標準GB?/T18630－2002?將酶抑制法作為蔬菜中有機磷及氨基甲酸酯農藥殘留量的簡易檢驗方法。目前酶抑制法主要有膜電極法和紙片法，具體是將乙酰膽堿（AchE?）吸附在載體(電極或紙片)上，遇到有機磷農藥時，乙酰膽堿（AchE）?活性被抑制，電極的讀數指示變化或紙片的顏色變化可定性檢測有機磷農藥。酶抑制法的優點是操作簡便，速度快，不需昂貴的儀器，適合現場檢測以及大批樣品的篩選檢測，不足之左右是精確度低，重復性、回收率還有待提高，并且該法僅限于蔬菜、水果和食品類有機磷農藥殘留的定性檢測，快速、定量的檢測還未見有應用。?

現有一些技術研究報道表明，有機磷農藥分子中含有P=O或P=S雙鍵結構，該結構特征表現出在紫外特定波長下顯示穩定吸收峰值的特性，這一特性僅用于不同有機磷農藥的定性檢測，利用這一特性，對有機磷農藥殘留進行定量檢測是可行的，但此類技術至今未見有報道。?

發明內容

本發明的目的是提供一種快速定量檢測氧化樂果殘留的方法。?

本發明的方法利用氧化樂果分子中所含P=O雙鍵結構在紫外特定波長下顯示穩定吸收峰值的特性建立，用紫外分光光度計對氧化樂果水溶液進行測定，其在紫外波長210nm處顯示最大的穩定吸收峰值，峰值圖見附圖，不同濃度的氧化樂果水溶液與其吸光度值的大小成正比，二者在坐標系中呈現正比例變化趨勢，以濃度為橫坐標、以其對應的吸光度值為縱坐標繪制標準曲線，即求得回歸方程，依此測定計算出待檢樣品的氧化樂果含量，具體步驟如下：?

步驟一，配制不同氧化樂果終濃度的標準水溶液：取氧化樂果標準溶液，以氧化樂果終濃度為0做為基準，按照0.5或1.0的濃度梯度配制一組不同氧化樂果終濃度的標準水溶液；