[發(fā)明專利]一種分離植物病原真菌的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310645938.4
• 申請日: 2013-12-04
• 公開（公告）號: CN103667080A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 單志慧;楊中路;陳海峰;沙愛華;邱德珍;張嬋娟;陳李淼;周蓉;楊定鵬;魏好;陳水蓮;周新安
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.分離植物病原真菌的方法，包括如下步驟：

（1）植物樣品前處理：將待分離植物樣品受病原真菌侵染的部位用體積比70-75%的酒精進(jìn)行擦拭，去除表面泥土，晾干酒精；

（2）病原真菌的分離培養(yǎng)：將經(jīng)過步驟（1）前處理的植物樣品置于分離培養(yǎng)基上，25-28℃培養(yǎng)1-2天；

（3）病原真菌的純化培養(yǎng)：將經(jīng)過步驟（2）培養(yǎng)得到的菌落邊緣的菌絲轉(zhuǎn)入純化培養(yǎng)基中25-28℃培養(yǎng)3-4天，重復(fù)操作2～4次，每次重復(fù)均將上一次培養(yǎng)所得菌落邊緣的菌絲轉(zhuǎn)入新的純化培養(yǎng)基中25-28℃培養(yǎng)3-4天，最終得到純化的病原真菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述分離培養(yǎng)基為含有終濃度為100mg/L頭孢霉素的PDA固體培養(yǎng)基；所述純化培養(yǎng)基為不含有任何抗生素的PDA固體培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：在步驟（1）中，將所述待分離植物樣品受病原真菌侵染的部位用酒精進(jìn)行擦拭并晾干后，還包括將所述待分離植物樣品受病原真菌侵染部位的組織切成（0.2～0.3）cm×（0.2～0.3）cm的小塊的步驟。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：在步驟（3）中，所述菌落邊緣的菌絲為取自菌落邊緣處面積為0.3cm×（0.3～0.5）cm的菌絲。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述植物為大豆。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述病原真菌為非專性寄生真菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求6中任一所述的方法，其特征在于：所述病原真菌為寄生在植物體表面的病原真菌。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7中任一所述的方法，其特征在于：所述病原真菌為炭疽病病原真菌、擬莖點霉種腐病病原真菌或黑斑病病原真菌。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：所述炭疽病病原真菌為辣椒炭疽菌（Colletotrichum?capsicii）；或

所述擬莖點霉種腐病病原真菌為擬莖點霉菌（Phomopsis?longiculla）；或

所述黑斑病病原真菌為細(xì)極鏈格孢菌（Alternaria?tenuissima）。

10.一種在分離植物病原真菌過程中處理待分離樣品的方法，是將待分離植物樣品受病原真菌侵染的部位用體積比70-75%的酒精進(jìn)行擦拭，去除表面泥土，晾干酒精。