[發明專利]一種脂肪乳劑及其制備方法及其應用及方法、以及一種血栓形成前狀態動物模型

在審

• 申請號: 201310639837.6
• 申請日: 2013-12-03
• 公開（公告）號: CN103860594A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 馬建林
• 申請（專利權）人: 馬建林
• 主分類號: A61K35/12
• 分類號: A61K35/12;A61K9/107;A01K67/027;A61K31/575;A61K31/505
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 黃冠華

技術領域

本發明涉及動物實驗領域，特別是指一種脂肪乳劑，本發明還涉及一種脂肪乳及的制備方法，本發明還涉及一種脂肪乳劑在建立家兔血栓形成前狀態動物模型的應用及應用方法，本發明還涉及一種血栓形成前狀態動物模型。?

背景技術

高血脂癥及/或血栓形成被公認為是動脈粥樣硬化（AS）的危險因子，但其致病機理非常復雜，有些方面還不是十分清楚，為了闡明其致病機理，血栓形成前狀態（PST）動物模型的制作尤為重要，目前，動物實驗中常采用高脂飼料喂養制備血栓形成前狀態動物模型，該方法對于大、小鼠雜食性動物的制備效果尚可，但由于鼠類采血量極少，不能同時檢測數個相關的指標，并且受到動物食性、劑量、周期等因素的影響，造成血栓形成前狀態模型質量不穩定，且復制時間較長（達3-4個月），因而限制了其在制備動物模型中的應用；而采用高脂飼料喂養制備家兔血栓形成前狀態動物模型可以避免這方面缺陷，可以從心臟一次取血達10ml，能夠同時檢測幾個相關指標，但由于動物食性等因素造成劑量不容易準確投喂，并且喂養周期長，給實驗帶來一定的困難。?

發明內容

本發明的一個目的是提出一種脂肪乳劑，制備簡單，成本低。?

本發明的另一個目的是提出一種脂肪乳劑的制備方法，過程簡單，適合推廣。?

本發明的另一目的是提出一種脂肪乳劑在建立家兔血栓形成前狀態動物模型的應用及應用方法，過程簡單，能夠縮短建立時間，提高實驗效率。?

本發明的另一個目的是提出一種血栓形成前狀態動物模型，建立簡單，滿足實驗的需求。?

本發明的技術方案是這樣實現的：一種脂肪乳劑，包括：膽固醇、豬油、膽酸鈉、丙基硫氧嘧啶、吐溫80、丙二醇和水。?

優選的，所述脂肪乳劑中，主要組分的濃度為，膽固醇100g/L，豬油200g/L，膽酸鈉20g/L，丙基硫氧嘧啶10g/L。?

所述脂肪乳劑的制備方法，包括以下步驟：?

a、取80份豬油至容器中，加熱至融化；?

b、繼續加入40份膽固醇并使之融化；?

c、繼續加入8份膽酸鈉和4份丙基硫氧嘧啶，攪勻；?

d、加入水、84-88份吐溫80和83-84份丙二醇，攪勻；?

e、繼續加入水至主要組分達到設定的濃度。?

所述脂肪乳劑的在建立家兔血栓形成前狀態動物模型中的應用。?

所述脂肪乳劑在建立家兔血栓形成前狀態動物模型的應用，包括以下步驟：?

1）家兔除給予普通飼料150g/只/天喂養外，還取所述脂肪乳劑按照2ml/kg·ｄ進行灌胃，每天一次，持續兩周；?

2）灌胃前后分別從耳中央動脈6ml（采血前禁飲食12h），然后分別進行如下操作：?

2.1）取其中3ml用20g/L?EDTA-Na2抗凝（抗凝劑：標本=1:9），2500r/min離心5min，取血漿低溫冰箱保存，取部分紅細胞測定：膜流動性（M-Flu）、E-MDA（紅細胞-丙二醛）和E-SOD（紅細胞超氧化物歧化酶）含量；?

2.2）將剩下的紅細胞酶法測定M-TC含量；?

2.3）取血漿放兔法測定TXB₂、6-Keto-PGF₁、ET，酶聯免疫吸附雙抗體夾心法測定GMP-140，發色底物法測定t-PA、PAI；?

2.4）另采3ml直接離心測定血清酶法TC、TG、APOAI、APOB，免疫濁度法vWF，?

2.5）另取部分動脈血高效薄層層析法測定PAF含量；?

2.6）灌胃兩周后處死動物做肉眼及光鏡觀察；?

3）將灌胃前后測定的各項指標進行對比和分析。?

其中，步驟2.1中，膜流動性（M-Flu）采用如下方法進行測定：?

用PBS洗滌紅血球2次配成4*10⁷細胞/ml濃度的紅細胞懸液，按照1:1與DPH（熒光探針）標記液混勻，于25℃保溫30min，離心棄去標記殘液，用PBS洗滌細胞2次，再用PBS稀釋成2ml懸液，在25℃下采用熒光光度計分別測定與激發偏振光振動方向平行、垂直時熒光偏振強度，根據公式計算出M-Flu。?

其中，步驟2.2中，采用如下方法進行測定：?