[發明專利]一種乳酸片球菌菌株冷凍干燥制劑的制備方法

無效

• 申請號: 201310631973.0
• 申請日: 2013-11-29
• 公開（公告）號: CN103627637A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 韓燁;洪小迪;譚茜倩;周志江
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 宋潔瑾

技術領域

本發明涉及一種冷凍干燥制劑的制備方法，特別涉及一種乳酸片球菌菌株冷凍干燥制劑的制備方法及使用方法。

背景技術

自人類使用乳酸菌生產發酵食品以來至少已有4000多年的歷史，主要用于生產發酵乳制品、發酵蔬菜和發酵肉制品等。乳酸菌發酵食品風味獨特，對人類和動物有益生作用，甚至有些菌種具有防腐作用，這些乳酸菌在世界范圍內深受喜愛。目前，乳酸片球菌能賦予食品柔和的酸味及香氣，改進食品的品質和營養，還具有抗菌、降低膽固醇、維持微生態環境、抗腫瘤、抗變異和增強免疫力等重要生物學功能。其作為發酵菌種已經大量的在多國的食品中使用，是備受人們喜愛和接受的有益菌群。此外，其顯著的抑菌效果，使得乳酸片球菌潛藏著巨大的應用價值和廣闊的應用前景。

國內外目前對于乳酸片球菌抑菌作用的研究大多都致力于片球菌素的研究上，主要是通過各種方法獲得高效高產量的片球菌素，如：優化培養及各種條件，基因工程技術等方法來獲得高效高產量的細菌素。但作為人體有益菌的乳酸菌屬乳酸片球菌，其活菌的使用及活菌抑菌試驗的研究報道卻在國內外鮮見。本發明所用乳酸片球菌菌株（pediococcus?acidilatici）PA003是天津大學化工學院周志江教授研究室的特有菌種，最初從一種發酵白菜（東北酸白菜）中分離純化得到的（已在專利CN102115720B中公開，可從天津大學化工學院食品科學系食品生物技術研究室獲取）。此乳酸片球菌PA003能發酵糖類生成片球菌素——是一種多肽的天然生物防腐劑，屬于熱穩定多肽細菌素，可以抑制很廣范圍內的革蘭氏陽性菌，具有廣譜抗菌性。而該片球菌是乳酸細菌的一個種，既能發酵一些食品，又具備防腐功能，人們還可以直接食用，其作為天然物質進行使用時比目前備受爭議的轉基因物質和人工合成物質或化合物更能得到大眾的認可和接受。

目前國內外尚未見乳酸片球菌冷凍干燥制劑研究的報道，因此，為了保證制作出的冷凍干燥制劑能穩定的長期貯藏，且復性后具有較高的存活率和較穩定的抑菌活性，以及在操作，貯藏，銷售，使用中更加方便可行，就必須針對制備乳酸片球菌菌株冷凍干燥制劑的各種影響因素進行認真研究。而從技術和商業相結合的角度出發，菌種的生長及其進行冷凍干燥、復性、冷凍干燥后長期貯藏過程中受到的影響都是該冷凍干燥制劑在復性后具有高活性和高生存能力的重要研究核心。而上述研究過程中的主要的影響因素又分為：固有的內在因素，包括：細胞的大小、遺傳基因、細胞壁和細胞膜的組成；生長因素，包括：可兼容溶質積累物、胞外多糖的產生、細胞膜的變化；半致死處理；干燥培養基，包括：脫脂牛奶粉、滲透性化合物、半滲透性化合物、不滲透的化合物；貯藏和復性，貯藏包括：氧氣、水分、溫度，復性包括：復性液的pH值、溫度、容量、營養物質成分和含量、能量物質成分和含量。因此，針對不同影響因素對于菌屬中不同的種有不同的影響結果，不同種之間的最適條件也不相同等可能出現的問題，再加上乳酸片球菌PA003菌株在制作為冷凍干燥制劑后，后期使用和長期儲存過程中必須具備抑菌活性，那么必須對冷凍干燥法制備冷凍干燥制劑及復性過程中影響乳酸片球菌PA003冷凍干燥制劑存活率和抑菌活性的三大影響因素（即：生長培養基，冷凍干燥保護劑，復性條件）進行逐一研究。研制出制備乳酸片球菌菌株冷凍干燥制劑的最佳方法。最終能讓乳酸片球菌菌株冷凍干燥制劑有效地，合理地，方便地作為天然生物防腐劑、發酵劑、飼料添加劑運用到各種食品和相關產業中。從而顯現出乳酸片球菌PA003冷凍干燥制劑天然，無害，無污染，安全的發酵功能和生物防腐功效。以上的所有研究發明都是具很高的研究價值和意義的。

發明內容

本發明的目的是提供一種乳酸片球菌菌株冷凍干燥制劑的制備方法，填補國內外乳酸片球菌冷凍干燥制劑的空白，解決乳酸片球菌菌株應用于大規模工業化生產困難的問題。

本發明是通過如下技術方案實現的：

一種乳酸片球菌菌株冷凍干燥制劑的制備方法，包括如下步驟：

（1）活化乳酸片球菌PA003菌種于液體MRS培養基中，利用生長培養基進行培養，使其活性及存活性最佳；

（2）利用冷凍離心機離心法收集菌體，洗滌后，將菌體懸浮于已滅菌的冷凍干燥保護劑培養基中，通過逐步冷凍法將溶液冷凍，待其結冰后準備進行冷凍干燥；

（3）將結冰樣品放置于冷凍干燥機中進行冷凍干燥；最后獲得的冷凍干燥制劑密封避光放置于室溫下貯藏。