[發明專利]檢測豬瘟病毒的RT-LAMP核酸試紙條試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201310629121.8
• 申請日: 2013-11-29
• 公開（公告）號: CN103602761A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 陳金頂;鄧潔汝;勾紅潮;裴晶晶;劉翠翠;姚俊庸;趙明秋
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞;楊曉松

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種檢測豬瘟病毒的RT-LAMP核酸試紙條試劑盒及應用。?

背景技術

豬瘟（Classical?swine?fever，CSF）是由豬瘟病毒（Classical?swine?fever?virus，CSFV）引起的一種高發病率和高死亡率的烈性傳染病，感染過程可分為急性、亞急性、慢性、遲發性等多種。CSF急性病例多見于流行初期，主要表現為突然發病，皮膚、粘膜發紺，全身痙攣；初便秘，后腹瀉。后期出現步態不穩，隨后麻痹，倒地死亡。毒力較低的CSFV毒株可引起亞急性CSF或溫和性CSF，癥狀比較輕。妊娠母豬感染后出現“帶毒母豬綜合征”，發生流產、死胎、弱胎、木乃伊胎，新生仔豬死亡，耐過的豬終身帶毒。豬瘟在世界范圍內流行，是動物衛生組織要求申報的動物傳染病之一。?

該病1833年首次出現于美國的俄亥俄洲，現在遍布全世界。發達國家通常采取撲殺政策防止和消滅豬瘟，澳大利亞、加拿大、愛爾蘭、新西蘭、瑞士和美國等國家都陸續宣布消滅了豬瘟，但近年來歐洲一些已消滅豬瘟的國家又出現有豬瘟的報道。在我國，豬瘟流行呈現典型和非典型共存、持續感染與隱性感染共存、免疫耐受和帶毒綜合征共存等現象。我國自50年代中期以來，一直使用CSF兔化弱毒疫苗免疫控制CSF的大規模爆發流行。但是近半個世紀以來，CSF在我國仍屢禁不止，對畜產品造成的損失是無可估量的。?

CSFV為黃病毒科（Flaviviridae）瘟病毒屬（Pestivirus）成員，是有囊膜的單股正鏈RNA病毒，基因組大小約1.23×10⁴kb，僅含有一個大的開放讀碼框架（ORF）。整個ORF編碼一個由3898個氨基酸殘基組成的多聚蛋白，此多聚蛋白經病毒N^pro蛋白和細胞的蛋白酶裂解，形成4個結構蛋白（C、E0、E1、E2）以及至少7個非結構蛋白（N^pro、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B）。結構蛋白組裝成熟的病毒粒子與病毒的感染和誘導機體的免疫應答反應有密切關系，而非結構蛋白則對病毒基因組復制、病毒粒子的組裝成熟起調控作用。?

目前常用于檢測豬瘟病毒的方法包括病原的分離鑒定、血清學方法和?RT-PCR、熒光定量PCR。病原的分離鑒定是最傳統的檢測方法，其結果準確可靠，但其影響因素多，實際操作起來相當費時費力，因此在臨床應用中有一定的局限性；血凝抑制試驗、補體結合試驗、中和試驗和酶聯免疫吸附試驗等血清學試驗的敏感性及特異性較低，操作也比較復雜；而RT-PCR、熒光定量PCR技術需要特殊的儀器設備（如PCR儀和凝膠成像系統等）和專業人員進行相關的操作，對于在基層和現場檢測有局限性。因此建立一種快速，敏感，特異的檢測豬瘟病毒的方法是十分必要的。?