[發明專利]發酵生產9-OH-AD的恥垢分枝桿菌、菌劑、制備方法和應用

有效

• 申請號: 201310628652.5
• 申請日: 2013-11-28
• 公開（公告）號: CN103667126A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 劉喜榮
• 申請（專利權）人: 湖南新合新生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P33/00;C12R1/34
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所 43008
• 代理人: 趙洪

1.一種發酵生產9-OH-AD的恥垢分枝桿菌，其特征是，所述恥垢分枝桿菌（Mycobacterium?smegmatis）保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO:M2013544。

2.一種含權利要求1所述恥垢分枝桿菌的液體菌劑，其特征在于，所述液體菌劑中，所述恥垢分枝桿菌（Mycobacterium?smegmatis）的菌體濃度達到10億個/ml以上。

3.一種根據權利要求2所述的恥垢分枝桿菌的液體菌劑的制備方法，其特征是，

（1）斜面種子培養：將恥垢分枝桿菌（Mycobacterium?smegmatis）CCTCC?NO:M2013544接種于斜面種子培養基，28～32℃培養；

（2）一級種子培養：把上述斜面種子培養的菌落加入液體種子培養基中培養，溫度為28～32℃；

（3）二級種子培養：一級種子培養后的菌液接種到液體種子培養基中，接種量為9～11%，溫度為28～32℃，得液體菌劑。

4.根據權利要求3所述的恥垢分枝桿菌的液體菌劑的制備方法，其特征是，所述斜面種子培養基配方為，玉米漿9～11g/L、硫酸銨1.3～1.7g/L、磷酸二氫鉀0.45～0.55g/L、磷酸氫二鉀0.5～0.6g/L、蔗糖0.45～0.55g/L、七水硫酸鎂0.18～0.22g/L、七水硫酸亞鐵0.004～0.006g/L、七水硫酸鋅0.001～0.003g/L、瓊脂18～22g/L，調節pH值為7.1～7.2。

5.根據權利要求3所述的恥垢分枝桿菌的液體菌劑的制備方法，其特征是，液體種子培養基配方為，玉米漿9～11g/L、硫酸銨1.3～1.7g/L、磷酸二氫鉀0.45～0.55g/L、磷酸氫二鉀0.5～0.6g/L、蔗糖9～11g/L、七水硫酸鎂0.18～0.22g/L、七水硫酸亞鐵0.004～0.006g/L、七水硫酸鋅0.001～0.003g/L，調節pH值為7.1～7.2。

6.一種如權利要求2所述恥垢分枝桿菌的液體菌劑在發酵生產9-OH-AD中的應用，其特征是，將合格的液體菌劑接種到轉化培養基中，接種量為9～11%，轉化溫度為28～32℃，轉化完全后，離心，離心后的發酵液用氯仿提取，濃縮，冷卻，抽濾，濾餅層用甲醇沖洗，得9-OH-AD。

7.如權利要求6所述恥垢分枝桿菌的液體菌劑在發酵生產9-OH-AD中的應用，其特征是，所述轉化培養基重量配方為，磷酸二氫鉀0.07～0.09%，三水磷酸氫二鉀0.4～0.5%，磷酸氫二銨0.2～0.4%，葡萄糖0.45～0.55%，β-環糊精6～7%，植物甾醇1.8～2.2%，質量濃度為20-40%的有機硅消泡劑0.045～0.055%，微量營養物3～5%，pH為7～9，所述微量營養物的成分為七水硫酸鎂0.8～1.2%，七水硫酸鐵0.45～0.55%，七水硫酸鋅0.08～0.12%，質量濃度為20～40%的硫酸0.05%，其余為水。

8.如權利要求6所述恥垢分枝桿菌的液體菌劑在發酵生產9-OH-AD中的應用，其特征是，發酵培養的轉速為400～600rpm，空氣流量為0.18～0.22Nm3/h，罐壓0.045～0.055MPa。