[發明專利]山楊良種銀×山1333的組織培養方法

有效

• 申請號: 201310626728.0
• 申請日: 2013-11-29
• 公開（公告）號: CN103583371A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 白卉;李春明;張妍妍;李靜;王艷敏
• 申請（專利權）人: 黑龍江省林業科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 侯靜

技術領域

本發明涉及一種植物的組織培養方法。

背景技術

楊樹是我國北方普遍公認的用材林、防護林和園林綠化的優質速生樹種，但是在近半個世紀引選的1000多個品種中，沒有適于林區山地用材林造林的品種。而我國是以山地著稱于世的國家，山區占國土面積的三分之二以上，因此開展山地楊樹新品種推廣轉化十分必要。東北地區鄉土樹種中的山楊（Populus?davidiana?Dode）分布廣泛、適應性強、材質優良，適于林區山地用材林的營造。但是其生長速度緩慢，年平均胸徑生長僅4mm左右；扦插生根十分困難，繁殖率低；造林難成活，保存率低；心腐嚴重，20年生山楊心腐率高達70%，因此過去利用山楊造林很少。

黑龍江省林業科學研究所從“六五”到“九五”，主持了《新選楊樹用材和綠化品系研究》黑龍江省科技重點項目和《山楊良種選育》國家科技攻關專題，歷經二十年，從不同種源，不同雜交組合的1800多個無性系中，選育出了銀×山1333（P.alba×P.davidian?CL.‘1333’），2010年該品種通過了黑龍江省森工林區林木品種審定委員會組織的良種審定。該良種是適于林區山地營造速生豐產用材林的優質山楊雜交新品種，其干形通直，雄株，不飛絮，干皮白色，抗性強，生長快，材質好，17年生胸徑達17.99cm～19.00cm，樹高達15.37m～16.60m，單株材積0.87835m³～1.0866m³，是山地楊樹用材林、工業原料林、紙漿原料林等速生豐產林和城市園林綠化基地建設不可多得的良種資源。良種與鄉土山楊相比較：1、抗逆性高：種源提高10.1%，家系提高14%，無性系提高17%；2、材積生長量實際增益高：種源提高23.46%，家提高系47.2%，無性系提高61.47%；3、木材基本密度高：種源提高5.18%，家系提高6.12%，無性系提高6.61%。山楊良種銀×山1333填補了我國北方缺乏山地造林闊葉樹速生樹種的空白。山楊良種銀×山1333均為25年左右的成年樹木，許多研究表明，樹木性狀的表現力在一定生長階段通常與年齡成正相關，而營養繁殖能力卻與年齡成負相關。樹木個體一旦達到充分表現其優良性狀的年齡時，往往失去了旺盛的營養繁殖能力，這為組織培養提供了依據。山楊良種銀×山1333根分蘗能力強，但扦插生根極為困難，這影響了山楊良種銀×山1333的規模化繁殖與推廣。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有山楊良種銀×山1333植株組織培養困難、繁殖系數低、組培生根苗不健壯及移栽成活率低的問題，而提供山楊良種銀×山1333的組織培養方法。

本發明山楊良種銀×山1333的組織培養方法，是按以下步驟完成：

一、外植體的采集和前處理：將山楊良種銀×山1333植株的外植體在流水下沖洗1h～2h后，用質量濃度為70%～75%乙醇溶液對表面進行消毒10s～20s，然后用無菌水沖洗2～3遍，再用0.1%氯化汞消毒2.0min～4.0min后，用無菌水沖洗3～5遍，最后用無菌濾紙吸干無菌水，并對外植體進行處理，得到已消毒的外植體；

二、外植體的分化培養：將步驟一中得到的已消毒的外植體接種到已滅菌的不定芽分化培養基中，在溫度23℃～26℃、光照時間12h/d～14h/d，光強2500Lx～3500Lx和濕度70%～80%的條件下培養30d～45d，得到山楊良種銀×山1333的不定芽；

三、繼代增殖培養：將步驟二中得到的山楊良種銀×山1333不定芽接種到已滅菌的繼代增殖培養基中，在溫度23℃～26℃、光照時間10h/d～12h/d、光強2500Lx～3500Lx、光源為白熾日光燈和濕度70%～80%的條件下培養得到1.5cm～2.0cm高的山楊良種銀×山1333不定芽；

四、不定芽的生根培養：將步驟三得到1.5cm～2.0cm苗高的山楊良種銀×山1333不定芽轉接到已滅菌的不定芽生根培養基中，在溫度23℃～26℃、光照時間12h/d～14h/d、光強2500Lx～3500Lx、光源為白熾日光燈和濕度70%～80%的條件下培養至苗高為4cm～5cm且具有3～5片葉片，即得山楊良種銀×山1333再生組培苗；

五、再生組培苗的煉苗：在溫室內，將步驟四中得到山楊良種銀×山1333再生組培苗置于溫室苗床上，在環境溫度20℃～25℃，濕度80%～95%，光照強度3500Lx～4500Lx的條件下進行再生組培苗的煉苗，得到山楊良種銀×山1333植株；