[發明專利]山楊良種銀×山1333的組織培養方法

有效

• 申請號: 201310626728.0
• 申請日: 2013-11-29
• 公開（公告）號: CN103583371A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 白卉;李春明;張妍妍;李靜;王艷敏
• 申請（專利權）人: 黑龍江省林業科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 侯靜

1.山楊良種銀×山1333的組織培養方法，其特征在于山楊良種銀×山1333的組織培養方法，是按以下步驟完成：

一、外植體的采集和前處理：將山楊良種銀×山1333植株的外植體在流水下沖洗1h～2h后，用質量濃度為70%～75%乙醇溶液對表面進行消毒10s～20s，然后用無菌水沖洗2～3遍，再用0.1%氯化汞消毒2.0min～4.0min后，用無菌水沖洗3～5遍，最后用無菌濾紙吸干無菌水，并對外植體進行處理，得到已消毒的外植體；

二、外植體的分化培養：將步驟一中得到的已消毒的外植體接種到已滅菌的不定芽分化培養基中，在溫度23℃～26℃、光照時間12h/d～14h/d，光強2500Lx～3500Lx和濕度70%～80%的條件下培養30d～45d，得到山楊良種銀×山1333的不定芽；

三、繼代增殖培養：將步驟二中得到的山楊良種銀×山1333不定芽接種到已滅菌的繼代增殖培養基中，在溫度23℃～26℃、光照時間10h/d～12h/d、光強2500Lx～3500Lx、光源為白熾日光燈和濕度70%～80%的條件下培養得到1.5cm～2.0cm高的山楊良種銀×山1333不定芽；

四、不定芽的生根培養：將步驟三得到1.5cm～2.0cm苗高的山楊良種銀×山1333不定芽轉接到已滅菌的不定芽生根培養基中，在溫度23℃～26℃、光照時間12h/d～14h/d、光強2500Lx～3500Lx、光源為白熾日光燈和濕度70%～80%的條件下培養至苗高為4cm～5cm且具有3～5片葉片，即得山楊良種銀×山1333再生組培苗；

五、再生組培苗的煉苗：在溫室內，將步驟四中得到山楊良種銀×山1333再生組培苗置于溫室苗床上，在環境溫度20℃～25℃，濕度80%～95%，光照強度3500Lx～4500Lx的條件下進行再生組培苗的煉苗，得到山楊良種銀×山1333植株；

其中，所述的再生組培苗的煉苗，是按照下述步驟實現的：首先將培養瓶瓶口的覆蓋物松開煉苗1d～2d，然后在培養瓶瓶口面積的1/4～1/3沒有覆蓋物的條件下煉苗1d～2d，最后將培養瓶瓶口的覆蓋物全部去除煉苗2d～3d；

六、山楊良種銀×山1333組培苗出瓶定植后得到容器苗：將步驟五中得到的山楊良種銀×山1333植株從培養瓶中取出，放入清水中洗凈根部附著的培養基，將山楊良種銀×山1333植株的根系保留1.0cm～1.5cm，用質量濃度為1.00g/L～1.25g/L多菌靈浸泡15min～20min，再用無菌水沖洗3～5遍后移栽到已消毒的育苗基質中在晝溫21℃～29℃、夜溫18℃～21℃、濕度80%～95%和遮光率60%～70%的條件下培養3d-5d，然后在晝溫21℃～29℃、夜溫18℃～21℃、濕度80%～95%和遮光率30%～40%的條件下培養5d～10d；最后在晝溫21℃～29℃、夜溫18℃～21℃、濕度80%～95%和無遮光的條件下培養，待小苗成活且高度為40cm～50cm后，即得到山楊良種銀×山1333組培苗的容器苗。

2.根據權利要求1所述的山楊良種銀×山1333的組織培養方法，其特征在于步驟一中所述山楊良種銀×山1333植株的外植體為：從健壯的、沒有傷口和沒有病蟲的25年生的山楊良種銀×山1333植株上取外植體，每年1～2月份采集山楊良種銀×山1333植株帶休眠芽的莖段，每年5份采集山楊良種銀×山1333植株的葉片，每年5月份采集山楊良種銀×山1333植株的帶腋芽的莖段。

3.根據權利要求1所述的山楊良種銀×山1333的組織培養方法，其特征在于步驟一中所述的的已消毒的外植體為休眠芽、腋芽、帶葉柄葉片或不帶葉柄葉片。