[發明專利]利用展示纖維素酶的釀酒酵母菌群發酵生產乙醇的方法

在審

• 申請號: 201310618222.5
• 申請日: 2013-11-27
• 公開（公告）號: CN104673689A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 田沈;楊秀山
• 申請（專利權）人: 首都師范大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12P7/10;C12R1/865
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種釀酒酵母混合菌群，其特征在于，所述混合菌群包含展示有內切葡聚糖酶II的釀酒酵母重組菌Y5/EGII、展示有纖維二糖水解酶II的釀酒酵母重組菌Y5/CBHII以及展示有β-葡糖苷酶I的釀酒酵母重組菌Y5/BGLI。

2.根據權利要求1所述的混合菌群，其特征在于，所述內切葡聚糖酶II和纖維二糖水解酶II來自里氏木霉（Trichoderma?reesei），所述β-葡糖苷酶I來自棘孢曲霉（Aspergillus?aculeatus）。

3.權利要求1或2所述混合菌群的制備方法，其特征在于，以釀酒酵母Y5為受體，利用α凝集素作為錨定蛋白，分別將內切葡聚糖酶II、纖維二糖水解酶II以及β-葡糖苷酶I展示在釀酒酵母Y5的表面，將構建得到重組菌Y5/EGII、Y5/CBHII和Y5/BGLI按一定比例混合即得。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述重組菌的構建包括如下步驟：

1）纖維素酶基因的擴增：所述纖維素酶基因包括內切葡聚糖酶II基因、纖維二糖水解酶II基因以及β-葡糖苷酶I基因；

2）展示載體的構建：以pYD1作為出發載體，分別構建整合有內切葡聚糖酶II基因、纖維二糖水解酶II基因以及β-葡糖苷酶I基因的展示載體；

3）釀酒酵母的轉化：整合載體pAGA1經線性化，分別與步驟2）構建得到的展示載體共轉化至釀酒酵母Y5中構建相應的重組菌。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟3）中通過醋酸鋰轉化法將整合載體與展示載體共轉化至釀酒酵母Y5中。

6.利用權利要求1或2所述的混合菌群降解纖維素發酵生產乙醇的方法。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，混合菌群以無定形纖維素為唯一碳源進行纖維素生物降解，發酵生產乙醇。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，重組菌Y5/EGII、Y5/CBHII和Y5/BGLI經YPG誘導48h后，按1-2:1-2:1的初始接種細胞濕重比混合。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，重組菌Y5/EGII、Y5/CBHII和Y5/BGLI按2:1:1的初始接種細胞濕重比混合。

10.權利要求1或2所述的混合菌群在纖維素統合生物加工中的應用。