[發明專利]一種13C水稻愈傷組織制備方法

有效

• 申請號: 201310617358.4
• 申請日: 2013-11-29
• 公開（公告）號: CN103609449A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 宋亞娜;王鋒;蘇軍;付艷萍
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種水稻愈傷組織制備方法，其特征在于：其制備方法包括以下步驟：

水稻種子的消毒；

用NB培養基進行水稻種子愈傷的誘導及繼代培養；

用NBc培養基進行水稻愈傷組織的繼代培養；

檢測水稻愈傷組織中的¹³C豐度。

2.根據權利要求1所述的一種水稻愈傷組織制備方法，其特征在于：所述的水稻愈傷組織是含有¹³C的愈傷組織。

3.根據權利要求1所述的一種水稻愈傷組織制備方法，其特征在于：其具體步驟為：

取成熟的水稻種子，分別用質量分數為70%乙醇、0.1%?Tween20、10%?NaClO和無菌水進行種子消毒；

消毒后的種子濾干后接種到NB培養基上，于27-29℃生化培養箱暗培養10-20天，幼胚生出愈傷組織，去掉幼胚將愈傷組織轉接到NB培養基上繼代2-3次，每代培養10-20天；

選取長勢良好的愈傷組織接種到NBc培養基上進行繼代培養1-2次，每代培養10-20天；

挑取用NBc培養基繼代培養后的愈傷組織，用蒸餾水洗凈愈傷組織上殘留的培養基，然后將愈傷組織烘干磨碎后進行¹³C穩定性同位素豐度檢測。

4.根據權利要求1或2所述一種水稻愈傷組織制備方法，其特征在于：

NBC培養基配方為：硝酸鉀2830?mg·L^-1、硫酸銨463?mg·L^-1、磷酸二氫鉀400?mg·L^-1、硫酸鎂185?mg·L^-1、氯化鈣166?mg·L^-1、硼酸3?mg·L^-1、硫酸錳47.58?mg·L^-1、硫酸鋅2?mg·L^-1、碘化鉀0.75?mg·L^-1、鉬酸鈉0.25?mg·L^-1、硫酸銅0.025?mg·L^-1、氯化鈷0.025?mg·L^-1、硫酸亞鐵27.8?mg·L^-1、乙二胺四乙酸二鈉37.3?mg·L^-1、肌醇100?mg·L^-1、鹽酸硫胺素10?mg·L^-1、鹽酸吡哆醇1?mg·L^-1、尼克酸1?mg·L^-1、水解酪蛋白300?mg·L^-1、谷氨酰胺250?mg·L^-1、脯氨酸500?mg·L^-1、甘氨酸2?mg·L^-1、2,?4-D?2?mg·L^-1、¹³C葡萄糖30000?mg·L^-1、瓊脂2400?mg·L^-1，pH5.8-5.9；

NB培養基配方：硝酸鉀2830?mg·L^-1、硫酸銨463?mg·L^-1、磷酸二氫鉀400?mg·L^-1、硫酸鎂185?mg·L^-1、氯化鈣166?mg·L^-1、硼酸3?mg·L^-1、硫酸錳47.58?mg·L^-1、硫酸鋅2?mg·L^-1、碘化鉀0.75?mg·L^-1、鉬酸鈉0.25?mg·L^-1、硫酸銅0.025?mg·L^-1、氯化鈷0.025?mg·L^-1、硫酸亞鐵27.8?mg·L^-1、乙二胺四乙酸二鈉37.3?mg·L^-1、肌醇100?mg·L^-1、鹽酸硫胺素10?mg·L^-1、鹽酸吡哆醇1?mg·L^-1、尼克酸1?mg·L^-1、水解酪蛋白300?mg·L^-1、谷氨酰胺250?mg·L^-1、脯氨酸500mg·L^-1、甘氨酸2?mg·L^-1、2,?4-D?2?mg·L^-1、蔗糖30000?mg·L^-1、瓊脂2400?mg·L^-1、pH5.8-5.9。

5.一種如權利要求1或2所述方法制備的水稻愈傷組織的應用，其特征在于：¹³C水稻愈傷組織可作為評價轉基因水稻對土壤微生物多樣性影響的試驗材料。