[發(fā)明專利]一種川貝母多倍體脫毒苗的培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310616273.4
• 申請日: 2013-11-27
• 公開（公告）號: CN103598100A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王躍華;劉濤;江明殊;楊敏;何詩虹;郭翠平;王曉蓉;李睿玉;許志強(qiáng);王磊
• 申請（專利權(quán)）人: 成都大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G1/00
• 代理公司: 成都科奧專利事務(wù)所(普通合伙) 51101
• 代理人: 王蔚

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種川貝母植物的組織培養(yǎng)方法，特別是涉及一種川貝母多倍體脫毒苗的培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

川貝母Fritillaria?cirrhosa?D.Don）是百合科多年生草本植物，生長在海拔3500m—4500m的高度，主產(chǎn)于四川、西藏、云南等省區(qū)。川貝母具有清熱潤肺，化痰止咳之功效，用于肺熱燥咳，干咳少痰，陰虛勞嗽，咯痰帶血等癥狀。川貝母是稀有的治療咳嗽等的良藥，由于川貝母價(jià)格昂貴，加之近年來無計(jì)劃盲目的采挖，自然資源日趨枯竭，預(yù)計(jì)在近幾十年內(nèi)也難以緩解。

川貝母植物的繁殖常采用以種子進(jìn)行的有性生殖和以鱗莖進(jìn)行的無性繁殖兩種方式。但不論是采用種子還是鱗莖進(jìn)行的繁殖，對于多年生的川貝母植物都會因各種環(huán)境因素而染上病毒，而植物一旦被侵染病毒后，就會產(chǎn)生畸形，并會嚴(yán)重抑制其生長，從而最終造成川貝母藥材的品質(zhì)和產(chǎn)量大大地下降。更為嚴(yán)重的是所感染的病毒不僅可在植物器官中長期生存，還可隨植物的器官一代代傳遞下去，從而使感染了病毒的植物品種會出現(xiàn)明顯地退化，甚至因感染嚴(yán)重而瀕臨滅絕。

多倍體植物具有植物器官“巨大化”特點(diǎn)，同時多倍體植物因基因數(shù)目增多和基因活性及酶的差異性增強(qiáng)，因此其生態(tài)適應(yīng)性和對逆境的抗耐性較高。將川貝母植物的脫毒苗培育技術(shù)和多倍體誘導(dǎo)技術(shù)進(jìn)行有機(jī)結(jié)合，能培育出品質(zhì)優(yōu)良、生長速度快、有效組分含量高和抗逆性強(qiáng)的川貝母多倍體脫毒苗。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種脫毒效果好、生長速度快、有效組分含量高的川貝母多倍體脫毒苗的培養(yǎng)方法。

本發(fā)明提供的川貝母多倍體脫毒苗的培養(yǎng)方法包括川貝母組培鱗莖的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟和下列步驟：

多倍體不定根的獲得：將川貝母組培鱗莖先接種于1/2MS+IBA0.1～0.3mg·L^-1+秋水仙素200～700mg·L^-1的培養(yǎng)基中，在無光照和溫度為12～18℃的條件下培養(yǎng)2～5天，再轉(zhuǎn)入不含秋水仙素的上述培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為18～24℃、每天光照4～8h和光照強(qiáng)度為800～1200lx的條件下繼續(xù)培養(yǎng)，在川貝母鱗莖的基部有形狀粗大的多倍體不定根產(chǎn)生；

多倍體不定根的預(yù)處理：將多倍體不定根從根基部切下后接入MS+6-BA0.1～0.5mg·L^-1+甘油100～200ml·L^-1的培養(yǎng)基中,在無光照和培養(yǎng)溫度為35～40℃的條件下進(jìn)行15～25天的預(yù)培養(yǎng)處理；

多倍體不定根生長點(diǎn)區(qū)域細(xì)胞的培養(yǎng)：在超凈工作臺上，切取多倍體不定根上生長點(diǎn)區(qū)域的細(xì)胞，將其接入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基B5+6-BA0.5～2.0mg.L^-1+2,4-D0.5～4.0mg.L^-1中，在培養(yǎng)溫度為15～22℃、每天光照5～8h、光照強(qiáng)度為400～1000lx的條件下培養(yǎng)40～60天，獲得多倍體愈傷組織；

川貝母多倍體鱗莖芽的誘導(dǎo)：選取質(zhì)地較緊密、生長速度快且顏色為黃白色或淡黃色的多倍體愈傷組織，將其接入多倍體鱗莖芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA1.0～4.0mg·L^-1+IAA0.1～0.3mg·L^-1中，在培養(yǎng)溫度為18～22℃、每天光照12～20h、光照強(qiáng)度為1000～3000lx的條件下培養(yǎng)45～60天，獲得川貝母多倍體鱗莖芽；

多倍體鱗莖芽的生根培養(yǎng)：在超凈臺上切取生長1.0～3.0cm的多倍體鱗莖芽作為無根苗，將其轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA0.1～0.3mg·L^-1+IBA0.1～0.3mg·L^-1中誘導(dǎo)生根，獲得川貝母多倍體脫毒苗；

煉苗和移栽：選取長出2條以上不定根的川貝母多倍體脫毒苗，打開瓶蓋，在室內(nèi)煉苗3～5天后，將其從培養(yǎng)瓶中取出，洗去不定根上的培養(yǎng)基后，移栽至消毒后的松軟土壤中生長。