[發(fā)明專利]一種川貝母多倍體脫毒苗的培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310616273.4
• 申請(qǐng)日: 2013-11-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103598100A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王躍華;劉濤;江明殊;楊敏;何詩(shī)虹;郭翠平;王曉蓉;李睿玉;許志強(qiáng);王磊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;A01G1/00
• 代理公司: 成都科奧專利事務(wù)所(普通合伙) 51101
• 代理人: 王蔚

1.一種川貝母多倍體脫毒苗的培養(yǎng)方法，包括川貝母組培鱗莖的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟，其特征在于還包括如下步驟：

川貝母多倍體不定根的獲得：將川貝母組培鱗莖先接種于1/2MS+IBA0.1～0.3mg·L^-1+秋水仙素200～700mg·L^-1的培養(yǎng)基中，在無(wú)光照和溫度為12～18℃的條件下培養(yǎng)2～5天，再轉(zhuǎn)入不含秋水仙素的上述培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為18～24℃、每天光照4～8h和光照強(qiáng)度為800～1200lx的條件下繼續(xù)培養(yǎng)，在川貝母鱗莖的基部有形狀粗大的多倍體不定根產(chǎn)生；

多倍體不定根的預(yù)處理：將多倍體不定根從根基部切下后接入MS+6-BA0.1～0.5mg·L^-1+甘油100～200ml·L^-1的培養(yǎng)基中,在無(wú)光照和培養(yǎng)溫度為35～40℃的條件下進(jìn)行15～25天的預(yù)培養(yǎng)處理；

多倍體不定根生長(zhǎng)點(diǎn)區(qū)域細(xì)胞的培養(yǎng)：在超凈工作臺(tái)上，切取多倍體不定根上生長(zhǎng)點(diǎn)區(qū)域的細(xì)胞，將其接入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基B5+6-BA0.5～2.0mg.L^-1+2,4-D0.5～4.0mg.L^-1中，在培養(yǎng)溫度為15～22℃、每天光照5～8小時(shí)、光照強(qiáng)度為400～1000lx的條件下培養(yǎng)40～60天，獲得多倍體愈傷組織；

川貝母多倍體鱗莖芽的誘導(dǎo)：選取質(zhì)地較緊密、生長(zhǎng)速度快且顏色為黃白色或淡黃色的多倍體愈傷組織，將其接入多倍體鱗莖芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA1.0～4.0mg·L^-1+IAA0.1～0.3mg·L^-1中，在培養(yǎng)溫度為18～22℃、每天光照12～20h、光照強(qiáng)度為1000～3000lx的條件下培養(yǎng)45～60天，獲得川貝母多倍體鱗莖芽；

多倍體鱗莖芽的生根培養(yǎng)：在超凈臺(tái)上切取生長(zhǎng)1.0～3.0cm的多倍體鱗莖芽作為無(wú)根苗，將其轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA0.1～0.3mg·L^-1+IBA0.1～0.3mg·L^-1中誘導(dǎo)生根，獲得川貝母多倍體脫毒苗；

煉苗和移栽：選取長(zhǎng)出2條以上不定根的川貝母多倍體脫毒苗，打開(kāi)瓶蓋，在室內(nèi)煉苗3～5天后，將其從培養(yǎng)瓶中取出，洗去不定根上的培養(yǎng)基后，移栽至消毒后的松軟土壤中生長(zhǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種川貝母多倍體脫毒苗的培養(yǎng)方法，其特征在于所述川貝母組培鱗莖的誘導(dǎo)培養(yǎng)步驟是：選取生長(zhǎng)二年以上的川貝母鱗莖上的鱗片葉，用流水沖洗干凈后進(jìn)行消毒處理，然后接入MS+6-BA1.0～3.0mg·L^-1+IAA0.1～0.5mg·L^-1+KT0.5～1.5mg·L^-1培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為16～22℃、每天光照6～10h、光照強(qiáng)度為1000～1500lx的條件下誘導(dǎo)川貝母組培鱗莖。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種川貝母多倍體脫毒苗的培養(yǎng)方法，其特征在于：所述消毒處理是指在超凈臺(tái)上用濃度為0.1%～0.2%的升汞消毒4～8min，再用無(wú)菌水洗3～6次后用已滅菌的濾紙吸干材料表面的水分。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種川貝母多倍體脫毒苗的培養(yǎng)方法，其特征在于：多倍體不定根生長(zhǎng)點(diǎn)區(qū)域細(xì)胞的培養(yǎng)步驟中所述生長(zhǎng)點(diǎn)區(qū)域的長(zhǎng)度為0.2～1.0mm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種川貝母多倍體脫毒苗的培養(yǎng)方法，其特征在于：煉苗和移栽步驟中煉苗的培養(yǎng)條件為溫度8～18℃、相對(duì)濕度80%～90%、每天光照6～10h、光照強(qiáng)度400～800lx，移栽至松軟土壤中的培養(yǎng)條件為溫度12～22℃、相對(duì)濕度75%～80%、每天光照8～12h、光照強(qiáng)度為800～1000lx。