[發明專利]一種用于天然蛋白分子分離鑒定的梯度電泳方法有效
| 申請號： | 201310613929.7 | 申請日： | 2013-11-28 |
| 公開（公告）號： | CN103675072B | 公開（公告）日： | 2017-01-04 |
| 發明（設計）人： | 李欣;陳紅兵;周建文;高金燕;謝秀玲;吳志華;楊安樹;佟平 | 申請（專利權）人： | 南昌大學 |
| 主分類號： | G01N27/447 | 分類號： | G01N27/447 |
| 代理公司： | 南昌新天下專利商標代理有限公司36115 | 代理人： | 施秀瑾 |
| 地址： | 330031 江西省*** | 國省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 天然 蛋白 分子 分離 鑒定 梯度 電泳 方法 | ||
1.一種用于天然蛋白分子分離鑒定的梯度電泳方法，其特征是按以下步驟：
（1）配置梯度膠、堆積膠及緩沖液：
a）8~15%梯度膠溶液：40%的儲液，其中丙烯酰胺中丙烯酰胺:N，N-甲叉雙丙烯酰胺=?29:1，1.5M的?pH=8.8的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸以及10%的過硫酸銨、超純水、四甲基乙二胺；
b）堆積膠溶液：40%的儲液，其中丙烯酰胺中丙烯酰胺:N，N-甲叉雙丙烯酰胺=29:1，0.5M的pH=6.8的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸以及10%的過硫酸銨、超純水、四甲基乙二胺；
c)?上樣緩沖液：0.5M的pH=6.8的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸、0.5%的3,3’,5,5’-四溴苯酚磺酰酞、丙三醇、超純水；
d）電極緩沖液：0.025M三羥甲基氨基甲烷、0.192M的甘氨酸；
（2)上樣：采用凝膠電泳系統，凝膠板長度為74mm；樣品與等體積2×的上樣緩沖液混合均勻，離心1min；取10μl加入上樣孔中；
（3）電泳：電泳條件堆積膠為電壓60?V，時間30分鐘；梯度膠為電壓80V，時間120分鐘；電泳時采用常規方法冷卻，電泳溫度控制在15℃以下；
（4）混合物中不同組分蛋白質分離的判定：電泳后凝膠經染色，脫色后成像，分析蛋白分離情況；經參考純蛋白的對照，根據每個泳道里的分離的條帶，分別判定混合物中不同組分的蛋白，并通過Quality?One軟件定量出不同組分蛋白的純度。
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