[發明專利]一株短小芽孢桿菌、該菌株的獲取方法及該菌株在煙草特有亞硝胺定向降解中的應用

有效

• 申請號: 201310610097.3
• 申請日: 2013-11-27
• 公開（公告）號: CN103667120A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 夏振遠;雷麗萍;汪安云;吳玉萍;莫笑晗;馬雁軍;周俊
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;A24B15/20;C12R1/07
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116
• 代理人: 姜開俠

1.一株短小芽孢桿菌（Bacillus?pumilus）05-5402，已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏編號為CGMCC?No.7418。

2.如權利要求1所述的短小芽孢桿菌，其特征在于所述菌株可在以4-甲基亞硝胺基-1-3-吡啶基-1-丁酮為唯一碳源和氮源的培養基中生長。

3.如權利要求1或2所述的短小芽孢桿菌，其特征在于所述菌株對調制或制絲過程煙葉或煙絲中NNN、NNK、NAB和NAT的總降解率為12.2~17.3%。

4.一種權利要求3所述的短小芽孢桿菌的獲取方法，包括分離、篩選及純化工序，具體包括：

A、分離：將煙株組織或植煙土壤研磨后加入無菌水，于室溫下振蕩提取25~35min，得到提取懸濁液，將提取懸濁液用稀釋平板的方法分離能在分離培養基上生長的菌株；

培養條件為：25~30℃，時間40~55h；

分離培養基成分以g/L計為：瓊脂12.0~18.0、K₂HPO_4?1.4~1.8、KH₂PO_4?0.3~0.5、NaCl?0.08~0.12、MgSO₄·7H₂O?0.1~0.3、CaCl_2?0.04~0.06、MnSO₄·H2O?0.001~0.003、CuSO₄·5H₂O?0.0001、ZnSO₄·7H₂O?0.0002、NaMoO₄·2H₂O?0.0002、尼古丁0.8~1.2，pH?6.5~7.5；

B、篩選：將分離出的菌株轉接到篩選培養基平板上，得到一菌落長勢旺盛的細菌菌株；

培養條件為：25~30℃，時間40~55h；

篩選培養基成分以g/L計為：瓊脂12.0~18.0、K₂HPO_4?1.4~1.8、KH₂PO_4?0.3~0.5、NaCl?0.08~0.12、MgSO₄·7H₂O?0.1~0.3、CaCl_2?0.04~0.06、MnSO₄·H2O?0.001~0.003、CuSO₄·5H₂O?0.0001、ZnSO₄·7H₂O?0.0002、NaMoO₄·2H₂O?0.0002、NNK?0.8~1.2，pH?6.5~7.5；

C、純化：將篩選出的菌株用純化培養基平板進行劃線純化，獲得長勢旺盛的單菌落，即短小芽孢桿菌（Bacillus?pumilus）05-5402；

培養條件為：25~30℃，時間40~55h；

純化培養基成分以g/L計為：蛋白胨8.0~12.0、牛肉浸膏2.0~4.0、NaCl4.0~6.0、瓊脂15.0~19.0，pH7.0~7.5。

5.如權利要求4所述的獲取方法，其特征在于步驟A所述的煙株組織為烤煙K326的葉片或莖。