[發明專利]一株短小芽孢桿菌、該菌株的獲取方法及該菌株在煙草特有亞硝胺定向降解中的應用有效

申請號：	201310610097.3	申請日：	2013-11-27
公開（公告）號：	CN103667120A	公開（公告）日：	2014-03-26
發明（設計）人：	夏振遠;雷麗萍;汪安云;吳玉萍;莫笑晗;馬雁軍;周俊	申請（專利權）人：	云南省煙草農業科學研究院
主分類號：	C12N1/20	分類號：	C12N1/20;C12N1/02;A24B15/20;C12R1/07
代理公司：	昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116	代理人：	姜開俠
地址：	650021***	國省代碼：	云南;53
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摘要：
搜索關鍵詞：	短小芽孢桿菌菌株獲取方法煙草特有亞硝胺定向降解中的應用
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于微生物應用技術領域，具體涉及一株能實現煙草特有亞硝胺定向降解的短小芽孢桿菌，及其獲取方法和在煙草特有亞硝胺定向降解中的應用。?

背景技術

TSNAs是煙草特有的N-亞硝基類化合物，是煙葉中重要的有害成分，對吸煙者的健康存在嚴重影響。NNN、NNK、NAB、NAT是煙草和煙氣中主要的TSNAs，尤其NNN與NNK均為動物強致癌物，危害極大。影響煙草中TSNAs含量的因素很多，其中主要有煙草類型、煙草組織、栽培方式、調制方法、微生物群落、氮肥施用量、硝酸還原酶及亞硝化酶的活性等。通過這些影響因子的改變可以調控TSNAs的形成量，但目前關于TSNAs降解的方法還不多。因此，針對煙葉調制過程或煙葉制絲過程中，煙葉或煙絲內的水、熱交換特點，分離、選育一株抗逆性好，能實現煙草特有亞硝胺定向降解的菌株，同時結合煙葉調制過程或煙葉制絲過程中環境溫、濕度變化的階段性特征，選擇適宜的施用方法，對于提高煙草品質，降低煙草特有亞硝胺對人體健康及生活環境帶來的危害都具有十分重要的意義。?

發明內容

本發明的第一目的在于提供一株能實現煙草特有亞硝胺定向降解的短小芽孢桿菌。本發明的第二目的在于提供所述短小芽孢桿菌的獲取方法。本發明的第三目的在于提供所述短小芽孢桿菌在煙草特有亞硝胺定向降解中的應用。?

本發明的第一目的是這樣實現的：一株短小芽孢桿菌(Bacillus?pumilus)，命名為05-5402，經鑒定為短小芽孢桿菌(Bacillus?pumilus)的一個株系，是從煙株組織或植煙土壤中分離得到，已于2013年4月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101)，其保藏編號為CGMCC?No.7418。?

本發明的第二目的是這樣實現的：一種所述短小芽孢桿菌的獲取方法，包括分離、篩選及純化工序，具體包括：?

A、分離：將煙株組織或植煙土壤研磨后加入無菌水，于室溫下振蕩提取25～35min，得到提取懸濁液，將提取懸濁液用稀釋平板的方法分離能在分離培養基上生長的菌株；?

培養條件為25～30℃，時間40～55h；?

分離培養基成分以g/L計為：瓊脂12.0～18.0、K₂HPO₄1.4～1.8、KH₂PO₄0.3～0.5、NaCl0.08～0.12、MgSO₄·7H₂O0.1～0.3、CaCl₂0.04～0.06、MnSO₄·H2O0.001～0.003、CuSO₄·5H₂O0.0001、ZnSO₄·7H₂O0.0002、NaMoO₄·2H₂O0.0002、尼古丁0.8～1.2，pH6.5～7.5；?

B、篩選：將分離出的菌株轉接到篩選培養基平板上，得到一菌落長勢旺盛的細菌菌株；?

培養條件為：25～30℃，時間40～55h；?

篩選培養基成分以g/L計為：瓊脂12.0～18.0、K₂HPO₄1.4～1.8、KH₂PO₄0.3～0.5、NaCl0.08～0.12、MgSO₄·7H₂O0.1～0.3、CaCl₂0.04～0.06、MnSO₄·H2O0.001～0.003、CuSO₄·5H₂O0.0001、ZnSO₄·7H₂O0.0002、NaMoO₄·2H₂O0.0002、NNK0.8～1.2，pH6.5～7.5；?