[發(fā)明專利]一種血管緊張素完全抗原的制備方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310608983.2 | 申請日： | 2013-11-25 |
| 公開（公告）號： | CN103613660A | 公開（公告）日： | 2014-03-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張振斌;張影;董婷婷;李克錦;劉萍;欒大偉 | 申請（專利權(quán)）人： | 博奧賽斯（天津）生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/765 | 分類號： | C07K14/765;C07K14/77;C07K14/47;C07K14/795 |
| 代理公司： | 天津濱?？凭曋R產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211 | 代理人： | 李莉華 |
| 地址： | 300300 天*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 血管 緊張 完全 抗原 制備 方法 | ||
1.一種血管緊張素完全抗原的制備方法，其特征在于，以血管緊張素為原料，包括以下步驟：
（1）將血管緊張素溶于0.1mol/L鹽酸，載體蛋白溶于0.05MpH9.6的碳酸鹽緩沖液，分別制備抗原溶液和載體蛋白溶液；
（2）將濃度為1mol/LNaNO2緩慢滴入抗原溶液，常溫震蕩反應(yīng)20分鐘，得重氮化溶液；
（3）將重氮化溶液邊震蕩邊滴入載體蛋白溶液中，4℃震蕩反應(yīng)4小時，得反應(yīng)混合物；
（4）反應(yīng)混合物通過超濾、透析或者脫鹽柱處理除去反應(yīng)混合物中未偶聯(lián)的小分子物質(zhì)，緩沖液采用pH7.4的0.01M磷酸鹽緩沖液，得偶聯(lián)物。
2.如權(quán)利要求1所述的血管緊張素完全抗原的制備方法，其特征在于，所述血管緊張素為血管緊張素Ⅰ、血管緊張素Ⅱ、血管緊張素Ⅲ或血管緊張素1-7中的任一種。
3.如權(quán)利要求1所述的血管緊張素完全抗原的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中載體蛋白為含有游離氨基的生物大分子。
4.如權(quán)利要求1所述的血管緊張素完全抗原的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中，制備抗原溶液為1mg/ml，載體蛋白溶液為5mg/ml。
5.如權(quán)利要求1所述的血管緊張素完全抗原制備方法，其特征在于，所述步驟（2）濃度為1mol/L?NaNO2加入摩爾量與步驟（1）中加入的0.1mol/L鹽酸相等，邊加邊震蕩，滴加完成后常溫震蕩20分鐘，得重氮化溶液。
6.如權(quán)利要求1所述的血管緊張素完全抗原的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中，重氮化溶液中血管緊張素與載體蛋白摩爾比10-20:1。
7.如權(quán)利要求3所述的血管緊張素完全抗原的制備方法，其特征在于，所述生物大分子為牛血清白蛋白或者卵清蛋白或者牛丙種球蛋白或者鑰孔血藍(lán)蛋白。
8.如權(quán)利要求1所述的血管緊張素完全抗原制備方法，其特征在于所述步驟（3）將重氮化溶液緩慢滴加到載體蛋白溶液中，邊滴邊震蕩，滴加完成后4℃持續(xù)震蕩，反應(yīng)4小時，得到反應(yīng)混合液。
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