[發明專利]一種EPO突變體的毛細管電泳檢測方法

在審

• 申請號: 201310608883.X
• 申請日: 2013-11-26
• 公開（公告）號: CN104677971A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 金榮;王芳;單劍鋒;陳歷;樓丹
• 申請（專利權）人: 杭州九源基因工程有限公司
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 徐關壽

1.一種達依泊汀α精細結構的毛細管電泳檢測方法，所述方法包括如下的步驟：

（l）、通過毛細管電泳對含有達依泊汀α的樣品進行分離；

（2）、根據色譜峰面積對具有不同糖組分達依泊汀α進行定量測定；

其中，所述的毛細管電泳條件中，電泳緩沖液包括能維持在水溶液狀態下pH范圍為3.3-5.5的任一種緩沖液、1-10mM的腐胺和1-9M的尿素。

2.根據權利要求1所述的毛細管電泳檢測方法，其特征在于：所述方法步驟（1）中，石英毛細管總長范圍為70～200cm，柱內徑為25～75μm。

3.根據權利要求1所述的毛細管電泳檢測方法，其特征在于：所述方法步驟（1）中，毛細管電泳的電極電壓為10～50kv。

4.根據權利要求1所述的毛細管電泳檢測方法，其特征在于：所述方法步驟（1）中，毛細管電泳采用壓力進樣，壓力范圍為30～60mbar，時間范圍為5～30s。

5.根據權利要求1所述的毛細管電泳檢測方法，其特征在于：所述方法步驟（1）中，毛細管電泳的柱溫范圍為10～40℃。

6.根據權利要求1所述的毛細管電泳檢測方法，其特征在于：所述方法步驟（1）中，毛細管電泳時所使用檢測波長為紫外210-232nm。

7.根據權利要求1所述的毛細管電泳檢測方法，其特征在于：所述方法步驟（1）中，毛細管電泳分離的條件范圍為：石英毛細管總長范圍在70～200cm之間，柱內徑可以用25～75μm；所用的毛細管電泳緩沖液包括能維持在水溶液狀態下pH范圍為3.3-5.5的任一種緩沖液、1-10mM的腐胺和1-9M的尿素；毛細管電泳的電極電壓為10～50kv；電泳時采用壓力進樣，壓力范圍為30～60mbar，時間范圍為5～30s；柱溫范圍為10～40℃，檢測波長為紫外210-232nm。

8.根據權利要求1所述的毛細管電泳檢測方法，其特征在于：所述方法步驟（1）中，毛細管電泳分離的條件范圍為：石英毛細管總長范圍在90～140cm之間，柱內徑可以用40～60μm；毛細管電泳緩沖溶液可選自醋酸緩沖液或磷酸緩沖液，pH范圍為3.6～4.5，緩沖溶液中可加入1-10mM腐胺和1-9M尿素；毛細管電泳的電極電壓為10～50kv；電泳時采用壓力進樣，壓力范圍為30～60mbar，時間范圍為5～30s；柱溫范圍為10～40℃，檢測波長為紫外210-232nm。

9.根據權利要求1所述的毛細管電泳檢測方法，其特征在于：所述方法步驟（1）中，毛細管電泳分離的條件范圍為：本發明所使用石英毛細管總長范圍在90～140cm之間，柱內徑可以用40～60μm；毛細管電泳緩沖溶液包含1～100mM氯化鈉，1～100mM甘氨酸，1～100mM乙酸鈉，4～9M尿素，1-10mM腐胺，pH范圍為3.6～4.5；毛細管電泳的電極電壓為20～40kv；電泳時采用壓力進樣，壓力范圍為40～50mbar，時間范圍為10～20s；柱溫范圍為25～35℃，檢測波長為紫外214nm。

10.根據權利要求1所述的毛細管電泳檢測方法，其特征在于：所述方法步驟（2）中，各組分的定量檢測依據為，通過計算分離的目標峰面積占所有分離峰面積的百分比，得到該組分在含有達依泊汀α樣品中微不均一性的混合糖基化蛋白中的百分含量。