[發(fā)明專利]一種乙型肝炎病毒的全自動(dòng)快速核酸檢測(cè)試劑管及其使用方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310608556.4
• 申請(qǐng)日: 2013-11-26
• 公開（公告）號(hào): CN103627820A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏放
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 諸暨脈達(dá)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 杭州華鼎知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 33217
• 代理人: 胡根良

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種乙型肝炎病毒(HBV)的全自動(dòng)快速核酸檢測(cè)試劑管，還涉及該種乙型肝炎病毒(HBV)的全自動(dòng)快速核酸檢測(cè)試劑管的使用方法。

背景技術(shù)

乙型肝炎病毒（hepatitis?B?virus，HBV）屬嗜肝DNA病毒科(hepadnaviridae)，主要侵犯肝細(xì)胞，在肝細(xì)胞內(nèi)定居復(fù)制并損害肝細(xì)胞，引起肝細(xì)胞炎癥、壞死、纖維化。我國(guó)目前乙肝病毒攜帶率為7.18%，其中約三分之一有反復(fù)肝損害，表現(xiàn)為活動(dòng)性的乙型肝炎或者肝硬化。乙型肝炎病毒基因組長(zhǎng)約3.2kb，為部分雙鏈環(huán)狀DNA，共有四個(gè)開放讀框，分別編碼病毒的Core核衣殼蛋白和S包膜蛋白，病毒復(fù)制酶（聚合酶)及一種與病毒基因表達(dá)有關(guān)的蛋白質(zhì)X。

乙型肝炎病毒基因檢查的實(shí)驗(yàn)室診斷主要依賴于血清特異性抗原抗體（ELISA）檢測(cè)和基因（DNA）檢測(cè)。ELISA方法是臨床診斷HBV感染的傳統(tǒng)手段，反映機(jī)體HBV感染的免疫狀態(tài)。而乙型肝炎病毒基因(DNA)檢測(cè)則是采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)，特異性擴(kuò)增乙肝病毒基因組片段，以近于2n的指數(shù)（n為循環(huán)次數(shù)），在數(shù)小時(shí)內(nèi)可將極微量的乙肝病毒基因(DNA)特定的分子片斷擴(kuò)增至1×10⁷～1×10⁸倍，大大提高了乙型肝炎病毒的檢出率，PCR技術(shù)相對(duì)于ELISA方法，靈敏度高，特異性強(qiáng)，而且不受免疫學(xué)方法的“窗口期”限制影響，為臨床診斷HBV感染提供了一種強(qiáng)有力的手段。

然而，隨著PCR等分子診斷技術(shù)在臨床檢驗(yàn)方面的推廣應(yīng)用，其局限性也日益顯現(xiàn)。主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面，一是由于常規(guī)PCR技術(shù)的高靈敏度，極易因微量樣品污染產(chǎn)生假陽性結(jié)果，因此常規(guī)PCR檢測(cè)對(duì)操作人員的素質(zhì)和操作環(huán)境都要求較高，按照衛(wèi)生部的標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)內(nèi)醫(yī)院如在臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目上開展運(yùn)用常規(guī)PCR技術(shù)，必須建立專用的PCR實(shí)驗(yàn)室，并對(duì)操作人員進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)后才能進(jìn)行，這必然提高了PCR檢測(cè)的使用成本。二是目前在做PCR反應(yīng)檢測(cè)之前，仍需依靠傳統(tǒng)的手工方式將臨床樣本中的核酸提取純化，然后再與PCR試劑混合進(jìn)行檢測(cè)反應(yīng)，程序繁瑣，耗時(shí)耗力，這在一定程度上限制了PCR檢測(cè)在臨床診斷方面，特別是對(duì)大批量樣本檢測(cè)時(shí)的普及運(yùn)用。

針對(duì)常規(guī)PCR技術(shù)的局限性，近年來出現(xiàn)了運(yùn)用新興的納米核酸磁珠技術(shù)自動(dòng)化提取生物樣本中的核酸，并聯(lián)機(jī)熒光定量PCR反應(yīng)儀，實(shí)現(xiàn)從核酸提取到PCR反應(yīng)的全自動(dòng)核酸提取擴(kuò)增系統(tǒng)。目前已有Roche、Cepheid、IQuum等公司出一管式全自動(dòng)核酸提取擴(kuò)增儀器，利用這些儀器平臺(tái)的全自動(dòng)病原體核酸檢測(cè)技術(shù)能夠?qū)⒑怂崽崛〉絇CR反應(yīng)的過程在一根檢測(cè)管內(nèi)的全自動(dòng)完成，極大地提高工作效率，有效地消除了假陽性污染風(fēng)險(xiǎn)，日益成為醫(yī)學(xué)分子診斷領(lǐng)域新的發(fā)展方向。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題就是提供一種操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)快速、靈敏度高的乙型肝炎病毒(HBV)的全自動(dòng)快速核酸檢測(cè)試劑管。

本發(fā)明的另一目的是提供該種乙型肝炎病毒(HBV)的全自動(dòng)快速核酸檢測(cè)試劑管的使用方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種乙型肝炎病毒的全自動(dòng)快速核酸檢測(cè)試劑管，包括用于裝入待測(cè)血清標(biāo)本的待測(cè)血清標(biāo)本腔及檢測(cè)試劑腔，所述檢測(cè)試劑腔包括：

用于裝入裂解緩沖液的裂解緩沖液腔，

用于裝入核酸提取磁珠的核酸提取磁珠腔，

用于裝入核酸提取洗滌液的核酸提取洗滌液腔，

用于裝入核酸提取洗脫液的核酸提取洗脫液腔，

用于裝入熒光定量PCR反應(yīng)液的熒光定量PCR反應(yīng)液腔，

以及用于裝入PCR反應(yīng)引物和探針的PCR反應(yīng)引物和探針腔；

所述PCR反應(yīng)引物的序列為：

HBV1:5'-CGCACCTCTCTTTACG-3’；

HBV2:5'-GGTGAAGCGAAGTGC-3’；

所述探針的序列為：

HBV-P:5'-CCGTCTGTGCCTTCTCATCT-3’。

優(yōu)選的，所述裂解緩沖液為含有異硫氰酸胍的緩沖液。

優(yōu)選的，所述裂解緩沖液包括以下組分：濃度為2mol/L的異硫氰酸胍、濃度為20×10^-3mol/L的檸檬酸鈉、濃度為0.1mol/L的β-巰基乙醇、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的十二烷基肌酸鈉、pH值為5.5的Tris-HCl緩沖液和濃度為10×10^-3mol/L的溶劑。其中，溶劑為生理鹽水或其他適于配制裂解緩沖液的溶劑。

優(yōu)選的，所述核酸提取磁珠為含有磁性納米微球的溶液。