[發明專利]一種乙型肝炎病毒的全自動快速核酸檢測試劑管及其使用方法

無效

• 申請號: 201310608556.4
• 申請日: 2013-11-26
• 公開（公告）號: CN103627820A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 夏放
• 申請（專利權）人: 諸暨脈達生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 杭州華鼎知識產權代理事務所(普通合伙) 33217
• 代理人: 胡根良

1.一種乙型肝炎病毒的全自動快速核酸檢測試劑管，其特征在于：包括用于裝入待測血清標本的待測血清標本腔（1）及檢測試劑腔，所述檢測試劑腔包括：

用于裝入裂解緩沖液的裂解緩沖液腔（2），

用于裝入核酸提取磁珠的核酸提取磁珠腔（4），

用于裝入核酸提取洗滌液的核酸提取洗滌液腔（3），

用于裝入核酸提取洗脫液的核酸提取洗脫液腔（5），

用于裝入熒光定量PCR反應液的熒光定量PCR反應液腔（6），

以及用于裝入PCR反應引物和探針的PCR反應引物和探針腔（7）；

所述PCR反應引物的序列為：

HBV1:5'-CGCACCTCTCTTTACG-3’；

HBV2:5'-GGTGAAGCGAAGTGC-3’；

所述探針的序列為：

HBV-P:5'-CCGTCTGTGCCTTCTCATCT-3’。

2.根據權利要求1所述一種乙型肝炎病毒的全自動快速核酸檢測試劑管，其特征在于：所述裂解緩沖液為含有異硫氰酸胍的緩沖液。

3.根據權利要求2所述一種乙型肝炎病毒的全自動快速核酸檢測試劑管，其特征在于：所述裂解緩沖液包括以下組分：濃度為2mol/L的異硫氰酸胍、濃度為20×10^-3mol/L的檸檬酸鈉、濃度為0.1mol/L的β-巰基乙醇、質量分數為0.5%的十二烷基肌酸鈉、pH值為5.5的Tris-HCl緩沖液和濃度為10×10^-3mol/L的溶劑。

4.根據權利要求1所述一種乙型肝炎病毒的全自動快速核酸檢測試劑管，其特征在于：所述核酸提取磁珠為含有磁性納米微球的溶液。

5.根據權利要求1所述一種乙型肝炎病毒的全自動快速核酸檢測試劑管，其特征在于：所述核酸提取洗滌液包括以下組分：濃度為0.1mol/L的甘氨酸、質量分數為0.01%的ProClin300系列防腐劑、pH值為5.5的Tris-HCl緩沖液和濃度為10×10^-3mol/L的溶劑。

6.根據權利要求1所述一種乙型肝炎病毒的全自動快速核酸檢測試劑管，其特征在于：所述核酸提取洗脫液包括以下組分：濃度為150×10^-3mol/L的氯化鎂水溶液、濃度為50g/L的牛血清白蛋白、pH值為8.5的Tris-HCl緩沖液和濃度為10×10^-3mol/L的溶劑。

7.根據權利要求1所述一種乙型肝炎病毒的全自動快速核酸檢測試劑管，其特征在于：所述熒光定量PCR反應液包括以下組分：含有2.5U的PCR反應Taq酶的4倍濃度PCR反應緩沖液。

8.根據權利要求1所述一種乙型肝炎病毒的全自動快速核酸檢測試劑管，其特征在于：所述裂解緩沖液腔（2）內裝有100μL的裂解緩沖液，

核酸提取磁珠腔（4）內裝有10μL的核酸提取磁珠，

核酸提取洗滌液腔（3）內裝有300μL的核酸提取洗滌液，

核酸提取洗脫液腔（5）內裝有20μL的核酸提取洗脫液，

熒光定量PCR反應液腔（6）內裝有10μL的熒光定量PCR反應液，

PCR反應引物和探針腔（7）內裝有10μL的PCR反應引物和探針，

其中，PCR反應引物和探針的濃度分別為0.8μmol/L和0.4μmol/L。

9.根據權利要求1至8任意一項所述一種乙型肝炎病毒的全自動快速核酸檢測試劑管，其特征在于：所述每個腔之間通過105℃熱封閉分離。

10.權利要求1所述一種乙型肝炎病毒的全自動快速核酸檢測試劑管的使用方法，其特征在于：依次包括以下步驟：

步驟一、全自動快速乙型肝炎病毒核酸提取純化程序：

將50～100μL的待測血清標本裝入待測血清標本腔，將全自動快速核酸檢測試劑管放入全自動核酸檢測儀；

所述待測血清標本與裂解緩沖液腔（2）內的裂解緩沖液混合均勻，樣本血清釋放核酸，時間30秒，得到混合液A；

然后混合液A與核酸提取磁珠腔（4）內的核酸提取磁珠混合均勻，核酸與磁珠結合，時間30秒，得到混合液B；

全自動核酸檢測儀步進電機擠壓混合液B移去裂解液雜質，結合核酸的磁珠與核酸提取洗滌液腔（3）內的核酸提取洗滌液混合均勻，洗滌純化核酸，時間40秒，得到混合液C；

全自動核酸檢測儀步進電機擠壓混合液C移去洗滌液，結合核酸的磁珠與核酸提取洗脫液腔（5）內的核酸提取洗脫液混合均勻，核酸自磁珠上分離至核酸提取洗脫液中，時間20秒，得到混合液D；

步驟二、乙型肝炎病毒快速熒光定量PCR反應程序：

通過全自動核酸檢測儀步進電機的擠壓，將含有混合液D與熒光定量PCR反應液腔（6）內的熒光定量PCR反應液、PCR反應引物和探針腔（7）內的PCR反應引物和探針混合均勻,實施快速熒光定量PCR反應,控制溫度在95℃下2分鐘，進行預變性，再進行40個循環變溫過程：先控制溫度在95℃下4秒，再控制溫度在60℃下8秒，此為一個循環變溫過程；其中單個循環升、降溫時間均為4秒。