[發明專利]一種4-氨基芐基磷酸二乙酯完全抗原的制備方法有效
| 申請號： | 201310606470.8 | 申請日： | 2013-11-25 |
| 公開（公告）號： | CN103613659A | 公開（公告）日： | 2014-03-05 |
| 發明（設計）人： | 張振斌;侯玉文;田云霞;李克錦;劉萍;欒大偉 | 申請（專利權）人： | 博奧賽斯（天津）生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/765 | 分類號： | C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K14/47;C07K1/107 |
| 代理公司： | 天津濱海科緯知識產權代理有限公司 12211 | 代理人： | 李莉華 |
| 地址： | 300300 天*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 氨基 芐基 磷酸 二乙酯 完全 抗原 制備 方法 | ||
1.一種4-氨基芐基磷酸二乙酯完全抗原的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）將4-氨基芐基磷酸二乙酯溶于去離子水制備抗原溶液，戊二醛溶于去離子水制備橋聯劑溶液，載體蛋白溶于pH9.6的0.05M碳酸鹽緩沖液制備載體蛋白溶液；
（2）將載體蛋白溶液和橋聯劑溶液混合并4℃避光攪拌30分鐘；
（3）用0.01M磷酸鹽緩沖液透析或者超濾除去載體蛋白溶液和橋聯劑溶液混合液中游離的橋聯劑，得到活化后的載體蛋白溶液；
（4）抗原溶液緩慢滴入活化后的載體蛋白溶液中，4℃攪拌20小時以上，經透析、脫鹽或者超濾除去游離抗原，得偶聯物；
（5）加NaBH4溶液還原偶聯物。
2.根據權利要求1所述的一種4-氨基芐基磷酸二乙酯完全抗原的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，所述載體為含有游離氨基的蛋白大分子。
3.根據權利要求1所述的一種4-氨基芐基磷酸二乙酯完全抗原的制備方法，其特征在于，所述的蛋白大分子為牛血清白蛋白或者卵清蛋白或者牛丙種球蛋白或者鑰孔血藍蛋白。
4.根據權利要求1所述的一種4-氨基芐基磷酸二乙酯完全抗原的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中，所述抗原溶液濃度為10mmol/L，載體蛋白溶液濃度為0.5mmol/L載體蛋白溶液，橋聯劑溶液溶液濃度為50mmol/L。
5.根據權利要求1所述的一種4-氨基芐基磷酸二乙酯完全抗原的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中按照4-氨基芐基磷酸二乙酯與載體蛋白摩爾比10-20:1的比例。
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