[發(fā)明專利]一種甲狀腺素標(biāo)記辣根過氧化物酶的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310606411.0
• 申請日: 2013-11-25
• 公開（公告）號: CN103575876A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張振斌;辛志勇;汪艷培;李克錦;劉萍;欒大偉
• 申請（專利權(quán)）人: 博奧賽斯（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 李莉華

1.一種甲狀腺素標(biāo)記辣根過氧化物酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將T4溶于二甲基亞砜溶液制備A溶液，HRP溶于碳酸鹽緩沖液中制備B溶液，然后在A溶液中加入正三丁胺溶液，冰浴持續(xù)攪拌一定時間，得溶液C，溶液C再加入氯甲酸異丁酯溶液，室溫攪拌一定時間后，得溶液D，將B溶液加入溶液D進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到反應(yīng)混合液E；

（2）反應(yīng)混合液E通過透析處理除去反應(yīng)混合物中未參與偶聯(lián)的小分子物質(zhì)，緩沖液采用pH7.4的0.01M磷酸鹽緩沖液，得偶聯(lián)物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種甲狀腺素標(biāo)記辣根過氧化物酶的制備方法，其特征在于，步驟（1）中制備的A溶液和B溶液的濃度分別為1mg/ml和5mg/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種甲狀腺素標(biāo)記辣根過氧化物酶的制備方法，其特征在于，所述溶液C中T4與HRP摩爾比5-10:1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種甲狀腺素標(biāo)記辣根過氧化物酶的制備方法，其特征在于，步驟（1）中正三丁胺加入T4溶液需冰浴。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種甲狀腺素標(biāo)記辣根過氧化物酶的制備方法，其特征在于，氯甲酸異丁酯加入量大于T4的物質(zhì)的量。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種甲狀腺素標(biāo)記辣根過氧化物酶的制備方法，其特征在于，步驟（1）中HRP溶液緩慢滴加到溶液D中，邊滴邊震蕩，滴加完成后4℃持續(xù)震蕩，反應(yīng)20小時以上，得到反應(yīng)混合液E。