[發(fā)明專利]水蛭指紋圖譜的建立方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310605877.9
• 申請(qǐng)日: 2013-11-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103558329A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙志全;蘇瑞強(qiáng);劉武占;李蔚群
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 魯南厚普制藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
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• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種水蛭指紋圖譜的建立方法，以及由該方法所得的水蛭標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，屬于中藥分析領(lǐng)域。

背景技術(shù)

水蛭為水蛭科動(dòng)物螞蟥Whitmania?pigra?Whitman、水蛭Hirudo?nipponica?Whitman或柳葉螞蟥Whitmania?acranulata?Whitman的干燥全體，夏、秋兩季捕捉，用沸水燙死，曬干或低溫干燥，其味咸、苦，性平，歸肝經(jīng)，有小毒。中醫(yī)認(rèn)為水蛭是一味傳統(tǒng)的破血藥，有逐血瘀、通經(jīng)脈、利水道的功效。水蛭在臨床上有著廣泛的應(yīng)用，以水蛭治療的臨床疾病主要有：慢性腎炎、經(jīng)脈曲張、前列腺炎、不孕、糖尿病、癌癥、心臟病、肝硬化、高血壓、高血脂癥、脈管炎、女子血閉、結(jié)膜炎與白內(nèi)障、哮喘等；同時(shí)，水蛭體內(nèi)含有水蛭素、組胺樣物質(zhì)、肝素、抗血栓素等多種藥效成分，對(duì)于消除手術(shù)后引起的后遺癥、阻礙血液凝固、促進(jìn)血液循環(huán)亦有重要作用。中國(guó)專利CN101412726A公開(kāi)了從螞蝗中分離得到3個(gè)新雜環(huán)類化合物水蛭胺A、B、C，并進(jìn)行了藥效學(xué)試驗(yàn)，結(jié)果表明新化合物具有抗細(xì)胞缺氧及抗腫瘤細(xì)胞作用，其中化合物C的抗腫瘤細(xì)胞作用較強(qiáng)，化合物A和B化合物的抗細(xì)胞缺氧及抗腫瘤細(xì)胞作用均很強(qiáng)。

目前，國(guó)內(nèi)外上市的中成藥中，有一部分就是含有水蛭或水蛭提取物的制劑，這類制劑主要用于治療心腦血管疾病，并取得了良好的效果，如腦血康顆粒、蛭龍血通膠囊、腦血康滴丸、復(fù)方水蛭口服液、芪參膠囊、通心絡(luò)膠囊等，可見(jiàn)，水蛭具有多種藥理藥效作用，有著廣闊的臨床應(yīng)用前景。但是，由于對(duì)水蛭中化學(xué)成分研究不充分，導(dǎo)致現(xiàn)有的藥品標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)水蛭或水蛭提取物的質(zhì)量控制方法大多為浸出物檢查、薄層鑒別等。例如，《中華人民共和國(guó)藥典2010版一部》水蛭藥材標(biāo)準(zhǔn)中采用水蛭對(duì)照藥材薄層鑒別，其含量測(cè)定也只是粗略地記錄水蛭浸出物消耗凝血酶的體積，以中和一個(gè)單位的抗凝血酶的量為一個(gè)抗凝血酶活性單位，其中規(guī)定，每1克水蛭含有抗凝血酶活性應(yīng)不低于16.0U，螞蝗、柳葉螞蝗應(yīng)不低于3.0U（式中的U為每1克含凝血酶活性單位，U/g）。以上鑒別或測(cè)量水蛭藥材的方法，缺乏對(duì)水蛭中有效化學(xué)成分的定性鑒別和含量測(cè)定，專屬性差，不能有效地控制水蛭及含有水蛭制劑的質(zhì)量。

中藥指紋圖譜技術(shù)是目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的用來(lái)控制中藥、天然藥物或中藥材整體質(zhì)量最有效、最準(zhǔn)確、最直接的手段，是一種綜合的、宏觀的和可量化的鑒別方法，其基本屬性是“整體性”和“模糊性”。“整體性”是指完整地比較色譜的特征“面貌”；“模糊性”強(qiáng)調(diào)的是對(duì)照物與待測(cè)樣品指紋圖譜的相似性。運(yùn)用指紋圖譜技術(shù)可以鑒別中藥材和中成藥的真?zhèn)危u(píng)價(jià)原料藥材、半成品和成品質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性。對(duì)于用指紋圖譜來(lái)控制水蛭藥材的質(zhì)量，國(guó)內(nèi)已有專利及文獻(xiàn)報(bào)道，例如，中國(guó)專利CN1844911A公開(kāi)了水蛭指紋圖譜的建立方法并公開(kāi)了特征指紋圖譜，但其以生理鹽水室溫浸泡16小時(shí)提取水蛭中的成分，試驗(yàn)周期長(zhǎng)，生理鹽水或水不能有效提出水蛭中的蝶啶類成分，所得的無(wú)關(guān)雜質(zhì)多，影響指紋圖譜的全面性和精確性；僅以次黃嘌呤作為參照物，而對(duì)水蛭中其它重要藥效及質(zhì)量標(biāo)志性成分，如尿嘧啶、黃嘌呤、尿苷、水蛭胺C、水蛭胺B、水蛭胺A等均沒(méi)有涉及，不能準(zhǔn)確、全面地反映水蛭藥材的質(zhì)量；梯度洗脫過(guò)程中，在流動(dòng)相不含有機(jī)相的時(shí)間段，普通C₁₈色譜柱填料中的C₁₈鏈的隨機(jī)卷曲將導(dǎo)致組分保留值變化，造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定。袁曉環(huán)等以HPLC指紋圖譜來(lái)控制水蛭注射液及復(fù)方水蛭注射液的質(zhì)量，并建立了水蛭注射液的指紋圖譜，但兩篇文獻(xiàn)水蛭指紋圖譜建立方法的局限性與中國(guó)專利CN1844911A相同，其注射液或復(fù)方注射液僅以次黃嘌呤作為參照物，而對(duì)水蛭中其它重要藥效成分及質(zhì)量標(biāo)志性成分，如尿嘧啶、黃嘌呤、尿苷、水蛭胺C、水蛭胺B、水蛭胺A等均沒(méi)有涉及，不能準(zhǔn)確、全面地反映水蛭注射液或復(fù)方水蛭注射液的質(zhì)量；且梯度洗脫過(guò)程中，在流動(dòng)相不含有機(jī)相的時(shí)間段，普通C₁₈填料中的C₁₈鏈的隨機(jī)卷曲將導(dǎo)致組分保留值變化，造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定（楊曉環(huán)，楊旭東，崔榮軍，等.水蛭注射液的HPLC指紋圖譜[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2008，39（7）：530～532.）、（楊曉環(huán)，楊旭東，王春濤，等.復(fù)方水蛭注射液HPLC指紋圖譜研究[J].中國(guó)中藥雜志，2008，33（15）：1825～1827.）。徐長(zhǎng)根等對(duì)水蛭凍干粉針劑指紋圖譜的建立方法進(jìn)行了研究，并得到了其指紋圖譜，但其僅以次黃嘌呤溶液作為參照物，不能全面、準(zhǔn)確反映水蛭凍干粉針劑中其它重要水蛭藥效成分的質(zhì)量；梯度洗脫過(guò)程中，在流動(dòng)相含極小比例（小于0.15%）有機(jī)相的時(shí)間段，普通C₁₈填料中的C₁₈鏈的隨機(jī)卷曲將導(dǎo)致組分保留值變化，造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定；并且其指紋圖譜上的特征峰太少，且分離不佳（徐長(zhǎng)根，羅世書，謝艷華.水蛭凍干粉針劑指紋圖譜評(píng)價(jià)[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30（22）：2667～2669.）。