[發明專利]一種乳鐵蛋白及乳過氧化物酶的純化方法

有效

• 申請號: 201310602964.9
• 申請日: 2013-11-25
• 公開（公告）號: CN103709246A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 趙建敏;王建武;王慧敏;李由;付明波;湯波;李寧
• 申請（專利權）人: 北京濟福霖生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/79
• 分類號: C07K14/79;C07K1/18;C07K1/20;C12N9/08
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種乳鐵蛋白及乳過氧化物酶的純化方法，其特征在于，其是以含有重組人乳鐵蛋白的乳樣為原料，通過預處理得到脫脂乳，再將所獲得的脫脂乳進行陽離子交換層析分離，并去除內毒素，然后分別在不同鹽濃度條件下將乳鐵蛋白與乳過氧化物酶洗脫分離，得到高純度的乳鐵蛋白及乳過氧化物酶，進一步通過疏水互作色譜將重組人乳鐵蛋白與動物內源乳鐵蛋白分離，最后對純化的蛋白純品進行濃縮脫鹽。

2.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述預處理為通過蝶式離心機進行脫脂，再利用0.14μm～1.4μm膜技術進行除菌，得到無菌脫脂乳。

3.根據權利要求1或2所述的純化方法，其特征在于，所述陽離子交換層析的陽離子交換樹脂的粒徑大小范圍為90μm～300μm，線性流速為50cm/h～300cm/h，而后通過疏水互作色譜疏水互作色譜進行分離純化，配基密度范圍為20～50μmol，線性流速為50cm/h～100cm/h。

4.根據權利要求3所述的純化方法，其特征在于，所述陽離子交換層析為在1～10mM?EDTA，2～6ms/cm，pH5～7.5的磷酸鹽緩沖液平衡離子交換層析柱上樣后，用8～15ms/cm的NaCl或KCl緩沖液洗脫乳過氧化物酶，用170ms/cm以下的NaCl或KCl緩沖液單獨洗脫乳鐵蛋白。

5.根據權利要求4所述的純化方法，其特征在于，所述陽離子交換層析為在2～6ms/cm,pH5～7.5的磷酸鹽緩沖液平衡離子交換層析柱上樣后，用9～15ms/cm的NaCl或KCl緩沖液中洗脫乳過氧化物酶，使用126ms/cm的NaCl或KCl緩沖液單獨洗脫乳鐵蛋白。

6.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述的疏水互作色譜為上樣到電導100-160ms/cm的硫酸銨，20-50mM，pH6.5-7.5磷酸鹽緩沖液平衡的疏水互作層析柱，包括Phenyl、Butyl和Octyl所有不同基質的疏水介質，優化Phenyl，流速為78-160cm/h，而后使用電導為50-70ms/cm的硫酸銨+20-50mM，pH6.5-7.5磷酸鹽緩沖液單一洗脫重組人乳鐵蛋白，使用電導為6ms/cm以下的20-50mM，磷酸鹽緩沖液單一洗脫動物內源乳鐵蛋白。

7.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述去除內毒素為采用濃度為0.1%～2%的非離子去污劑與濃度為1mM～10mM的金屬絡合劑相結合去除乳鐵蛋白純品中的內毒素。

8.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述蛋白濃縮脫鹽為將純化得到的乳鐵蛋白與乳過氧化物酶使用50kD以下的膜進行蛋白質濃縮脫鹽。

9.利用權利要求1-8任一項所述的純化方法得到的乳鐵蛋白在抗菌產品生產中的應用。

10.利用權利要求1-8任一項所述的純化方法得到的乳過氧化物酶在抗氧化產品生產中的應用。