[發(fā)明專利]犬細小病毒膠體金免疫層析檢測試紙條及制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310600672.1
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN103604924A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉潔;牟林琳;廖園園;何文輝;王威;漆世華;朱薇;溫文生;謝紅玲;馮釗
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢中博生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 武漢科皓知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測試紙條及制備方法，具體涉及一種犬細小病毒膠體金免疫層析檢測試紙條及制備方法。

背景技術(shù)

犬細小病毒（Canine?Parvovirus,CPV）是細小病毒屬成員，單鏈小DNA病毒。病毒粒子為等軸對稱的二十面體，外觀呈圓形或六邊形，無囊膜，病毒顆粒直徑為21nm～24nm，沉降系數(shù)為23S～27S。在1977年，首次從患有腸炎的病犬體內(nèi)分離獲得CPV，病犬以嘔吐、出血性腸炎、白細胞減少為主要特征，幼犬的易感性高，可引起幼犬的心肌炎；為了與犬極小病毒（MCV）相區(qū)別而命名為CPV-2，隨后在許多國家和地區(qū)的犬科動物中相繼被發(fā)現(xiàn)，發(fā)病率為50%～100%，死亡率為0%～50%，對養(yǎng)犬業(yè)和經(jīng)濟動物養(yǎng)殖業(yè)危害極大，并且也影響到了野生動物的生存，因此要建立快速有效的檢測方法，并針對該病進行有效治療。

我國已建立的用于檢測CPV抗體的血清學(xué)方法有血凝試驗、血凝抑制試驗、瓊脂擴散試驗等，但是由于CPV與貓泛白細胞減少癥病毒、水貂腸炎病毒三者之間能發(fā)生交叉血清學(xué)反應(yīng)，因此在實際應(yīng)用中這些方法常受到限制。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）可檢測CPV抗原，也可檢測CPV抗體；PCR檢測敏感性高，特異性強，可分辨野毒感染和疫苗免疫，但這兩種技術(shù)都需要特殊的儀器設(shè)備。利用膠體金標(biāo)記單克隆CPV表面抗體，制成檢測CPV抗原的膠體金檢測試紙條敏感性高，特異性強，穩(wěn)定性好，操作簡便快速，結(jié)果易于分析判定。王中力等，在中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報上發(fā)表的文章《犬細小病毒免疫膠體金診斷技術(shù)的研究》中提到的方法是標(biāo)記抗犬細小病毒單克隆抗體，包被抗犬細小病毒兔多抗。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的首要目的在于提供一種犬細小病毒膠體金免疫層析檢測試紙條，為快速檢測犬細小病毒，為臨床診斷提供可靠依據(jù)。該檢測試紙條采用膠體金標(biāo)記的抗犬細小病毒單克隆抗體F1做探針，包被抗犬細小病毒單克隆抗體B6和羊抗小鼠IgG的雙抗體夾心法檢測犬細小病毒，可供犬科動物及犬細小病毒易感動物的犬細小病毒檢測。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述犬細小病毒膠體金免疫層析檢測試紙條的制備方法。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種犬細小病毒膠體金免疫層析檢測試紙條，包括樣品吸收區(qū)、金標(biāo)探針區(qū)、固相化抗體區(qū)、吸水區(qū)和底板，樣品吸收區(qū)、金標(biāo)探針區(qū)、固相化抗體區(qū)和吸水區(qū)依次鋪設(shè)在底板上并相互部分重疊；金標(biāo)探針區(qū)包被有膠體金標(biāo)記的抗犬細小病毒單克隆抗體F1，其標(biāo)記量優(yōu)選為1～10μg/mL（每mL膠體金標(biāo)記1～10μg抗犬細小病毒單克隆抗體F1）；固相化抗體區(qū)（自金標(biāo)探針區(qū)至吸水區(qū)方向）依次有檢測線和對照線，檢測線包被有抗犬細小病毒單克隆抗體B6，包被量優(yōu)選為0.1～10μg/cm；對照線包被有羊抗小鼠IgG，包被量優(yōu)選為0.1～10μg/cm。所述的抗犬細小病毒單克隆抗體F1和B6由抗犬細小病毒單克隆抗體雜交瘤細胞株F1和B6產(chǎn)生；（劉潔等，分泌抗犬細小病毒單克隆抗體雜交瘤細胞株的建立，中國獸藥雜志，2013,47（7）：9-12），其中，抗犬細小病毒單克隆抗體雜交瘤細胞株F1保藏編號為CCTCC?NO：C2013175，抗犬細小病毒單克隆抗體雜交瘤細胞株B6保藏編號為：CCTCC?NO：C2013176。

所述的底板的材料優(yōu)選為聚乙烯板（PVC板）；所述的樣品吸收區(qū)的材料優(yōu)選為玻璃纖維膜；所述的金標(biāo)探針區(qū)的材料優(yōu)選為聚酯膜；所述的固相化抗體區(qū)的材料優(yōu)選為硝酸纖維素膜；所述的吸水區(qū)的材料優(yōu)選為吸水濾紙。

上述犬細小病毒膠體金免疫層析檢測試紙條的制備方法，包括如下步驟：將膠體金標(biāo)記的抗犬細小病毒單克隆抗體F1噴涂于聚酯膜上；在硝酸纖維素膜上依次包被檢測線（包被有抗犬細小病毒單克隆抗體B6）和對照線（包被羊抗小鼠IgG）；將玻璃纖維膜、包被有抗犬細小病毒單克隆抗體F1的聚酯膜、包被有檢測線和對照線的硝酸纖維素膜、和吸水濾紙組裝到聚乙烯板上得到犬細小病毒膠體金免疫層析檢測試紙條。

優(yōu)選的，所述的犬細小病毒膠體金免疫層析檢測試紙條的制備方法，包括如下步驟：