[發(fā)明專利]一種利用苯酚-硫酸測定多糖的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310598656.3
• 申請日: 2013-11-25
• 公開（公告）號: CN103674865A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李冬;張翠丹;梁瑜海;曾輝平;張杰
• 申請（專利權(quán)）人: 北京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28
• 代理公司: 北京思海天達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11203
• 代理人: 劉萍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于城市生活污水處理與再生領(lǐng)域，具體涉及污泥中多糖的測定方法。

背景技術(shù)

水是社會(huì)和經(jīng)濟(jì)可持續(xù)發(fā)展的基礎(chǔ)，隨著我國工業(yè)化進(jìn)程的加快，自然環(huán)境尤其是水環(huán)境遭到了較嚴(yán)重的破壞，江河及湖庫水環(huán)境質(zhì)量日趨惡化。從上世紀(jì)八十年代開始，國家加快了對水環(huán)境治理的步伐，污水處理率有了較大提高，然而緩流水體富營養(yǎng)化問題不僅沒有解決，而且有日趨嚴(yán)重的趨勢。

近些年來，人們?yōu)榱诉M(jìn)一步提高污水生物處理，已開始嘗試對污泥結(jié)構(gòu)的特性進(jìn)行研究。其中，胞外聚合物(EPS)是分布于細(xì)胞表面的高分子物質(zhì)，是細(xì)胞莢膜和細(xì)胞周圍粘液物質(zhì)的主要成分，它能夠表示其表面的物理-化學(xué)特性，比如荷電性、疏水性及其他的特性，有利于微生物細(xì)胞凝聚，在形成穩(wěn)定生物膜和顆粒污泥中起重要作用，是微生物聚集體的重要組成部分。EPS通常是由胞外蛋白質(zhì)(PN)、胞外多糖(PN)、DNA、脂類、腐殖酸。糖醛酸、氨基酸以及一些無機(jī)成分組成。不過大部分研究表明污泥EPS組分以PN、PS為主，其含量達(dá)污泥EPS總TOC的75%-89%。并且EPS對于污泥絮體、生物膜或者顆粒污泥的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性有重要的作用，這是由于產(chǎn)生EPS的微生物表具有粘附性。此外，EPS能抵御細(xì)胞在有害環(huán)境中受到的侵害。EPS的主要有機(jī)組分可以改變微生物細(xì)胞表面特性，影響著處理工藝的運(yùn)行參數(shù)，且EPS的可生化性與顆粒污泥聚集體的構(gòu)造、組成及性能有重要的聯(lián)系。所以EPS對細(xì)胞絮凝作用和污泥顆粒化都發(fā)揮著核心作用。

因此，對EPS組分的深入研究有助于我們更全面地理解好氧顆粒污泥形成機(jī)理，所以EPS的測定成為研究顆粒污泥形成的關(guān)鍵因素。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種多糖的測定方法。

本發(fā)明是多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，再以比色法測定。所述方法包括以下步驟：

1.一種利用苯酚-硫酸測定多糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定：稱取0.1g的葡萄糖溶于蒸餾水中，并移至100mL的容量瓶中，配置100μg/L的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液溶液；在螺口試管中分別加入0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20mL葡萄糖溶液，加水稀釋到2mL；添加質(zhì)量百分比濃度為98%的濃硫酸5.0ml，加蓋，震蕩5-10次，冷卻至常溫；去蓋，添加質(zhì)量百分比濃度為5%的苯酚溶液1ml，立即漩渦振蕩器搖勻，加蓋后于100℃加熱15min；冷卻至常溫，然后空顯色5-8min；用分光光度計(jì)在λ=490nm測定吸光度；從測得的吸光度，減去零濃度空白管的吸光度后，獲得校正吸光度，繪制以多糖含量為校正吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

2)污泥的預(yù)處理：取10ml-50ml污泥樣品于離心管中；配平，在室溫下以8000r/min離心機(jī)離心15min；倒掉上清液，加入磷酸鹽緩沖溶液，其中磷酸緩沖液為0.05mol/L?Na₃PO₄和0.15mol/L?NaCl，pH=7，將污泥稀釋至原體積，之后將污泥搖散后超聲處理3min；

3)多糖的提取：將預(yù)處理的污泥放在80℃水浴30min，每隔10min將污泥搖勻一次；冷卻至常溫后配平，最后在5000-8000r/min離心機(jī)離心15min，取上清液測定；

4)多糖的測定：取一定體積待測溶液于螺口試管中，加水使成2ml；添加質(zhì)量百分比濃度為98%的濃硫酸5.0ml，加蓋，震蕩5-10次，冷卻至常溫；去蓋，添加質(zhì)量百分比濃度為5%苯酚溶液1ml，加蓋立即漩渦振蕩器搖勻，然后于100℃加熱15min；冷卻至常溫，最后顯色5-8min；另取2ml蒸餾水同法操作加入試劑做空白對照；用分光光度計(jì)在λ=490nm測定吸光度；最后經(jīng)空白校正后，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的多糖的含量。

與現(xiàn)有多糖的測定方法相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

1)本發(fā)明較之前的方法，其平行性更好，能夠準(zhǔn)確地測定出多糖的含量，適用于多糖的定量分析；

2)本發(fā)明方法操作簡單、易行；

3)本發(fā)明的顯色靈敏、穩(wěn)定，顏色與濃度成正比，測定速度快。

附圖說明

圖1為多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

圖2為亞硝化顆粒污泥多糖的平行樣。

圖3為MBR污泥多糖的平行樣。

圖4本發(fā)明測定的MBR污泥的多糖含量圖。

圖5現(xiàn)有技術(shù)測定的MBR的多糖含量圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1: