[發明專利]一種利用苯酚-硫酸測定多糖的方法

無效

• 申請號: 201310598656.3
• 申請日: 2013-11-25
• 公開（公告）號: CN103674865A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 李冬;張翠丹;梁瑜海;曾輝平;張杰
• 申請（專利權）人: 北京工業大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28
• 代理公司: 北京思海天達知識產權代理有限公司 11203
• 代理人: 劉萍

1.一種利用苯酚-硫酸測定多糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)多糖標準曲線的測定：稱取0.1g的葡萄糖溶于蒸餾水中，并移至100mL的容量瓶中，配置100μg/L的葡萄糖標準液溶液；在螺口試管中分別加入0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20mL葡萄糖溶液，加水稀釋到2mL；添加質量百分比濃度為98%的濃硫酸5.0ml，加蓋，震蕩5-10次，冷卻至常溫；去蓋，添加質量百分比濃度為5%的苯酚溶液1ml，立即漩渦振蕩器搖勻，加蓋后于100℃加熱15min；冷卻至常溫，然后空顯色5-8min；用分光光度計在λ=490nm測定吸光度；從測得的吸光度，減去零濃度空白管的吸光度后，獲得校正吸光度，繪制以多糖含量為校正吸光度的標準曲線；

2)污泥的預處理：取10ml-50ml污泥樣品于離心管中；配平，在室溫下以8000r/min離心機離心15min；倒掉上清液，加入磷酸鹽緩沖溶液，其中磷酸緩沖液為0.05mol/L?Na₃PO₄和0.15mol/L?NaCl，pH=7，將污泥稀釋至原體積，之后將污泥搖散后超聲處理3min；

3)多糖的提?。簩㈩A處理的污泥放在80℃水浴30min，每隔10min將污泥搖勻一次；冷卻至常溫后配平，最后在5000-8000r/min離心機離心15min，取上清液測定；

4)多糖的測定：取一定體積待測溶液于螺口試管中，加水使成2ml；添加質量百分比濃度為98%的濃硫酸5.0ml，加蓋，震蕩5-10次，冷卻至常溫；去蓋，添加質量百分比濃度為5%苯酚溶液1ml，加蓋立即漩渦振蕩器搖勻，然后于100℃加熱15min；冷卻至常溫，最后顯色5-8min；另取2ml蒸餾水同法操作加入試劑做空白對照；用分光光度計在λ=490nm測定吸光度；最后經空白校正后，從標準曲線上查得相應的多糖的含量。