[發明專利]一種艾塞那肽的固相片段合成方法

有效

• 申請號: 201310593381.4
• 申請日: 2013-11-20
• 公開（公告）號: CN103613656A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 張忠旗;王慧;張騰;景山崗;韓彬;楊曉琳
• 申請（專利權）人: 陜西東大生化科技有限責任公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

技術領域

本發明屬于固相多肽合成技術領域，具體涉及全固相片段組裝合成艾塞那肽。

背景技術

艾塞那肽是一種含有39個氨基酸的活性多肽，氨基酸序列為：H₂N-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-COOH，是GLP-1的類似物，能夠刺激胰島β細胞再生，促進胰島素分泌，抑制胰高血糖素的釋放，具有控制血糖功效，艾塞那肽注射液通過減少2型糖尿病患者空腹和餐后血糖濃度，從而改善血糖控制。

艾塞那肽的制備方法目前主要采用傳統經典的固相多肽合成法，即將39個保護氨基酸從C端到N端依次逐個連接，最后切割得粗肽，純化得純品，此法合成效率低、產品含量低、純化成本高；目前的片段縮合方法有固相液相混合使用，此法要求片段純度較高，且液相反應過程中雜片段累積對產品含量影響大、過程較繁雜、純化成本高。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于克服傳統經典的固相多肽合成法合成長肽效率低、產品含量低、純化成本高的缺點，以及固相液相混合使用時過程較繁雜、純化成本高的缺點，提供一種合成效率高、純化成本低、易流程化、易規模化的全固相片段法合成艾塞那肽的方法。

解決上述技術問題所采用的技術方案由下述步驟組成：

1、合成Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-MBHA?Resin

（1）合成Fmoc-Ser(tBu)-MBHA?Resin

將Fmoc-Rink?Amide?MBHA?Resin用N,N-二甲基甲酰胺溶脹后，用哌啶與N,N-二甲基甲酰胺的體積比為1:4的混合液脫Fmoc-兩次，加入N,N-二甲基甲酰胺、Fmoc-Ser(tBu)-OH、1-羥基苯丙三唑、苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸、N,N′-二異丙基乙胺，在氮氣保護下，常溫攪拌1～3小時，得到Fmoc-Ser(tBu)-MBHA?Resin。

（2）合成Fmoc-Pro-Ser(tBu)-MBHA?Resin

將Fmoc-Ser(tBu)-MBHA?Resin用哌啶與N,N-二甲基甲酰胺的體積比為1:4的混合液脫Fmoc-兩次，加入N,N-二甲基甲酰胺、Fmoc-Pro-OH、1-羥基苯丙三唑、苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸、N,N′-二異丙基乙胺，在氮氣保護下，常溫攪拌1～3小時，得到Fmoc-Pro-Ser(tBu)-MBHA?Resin。

（3）合成Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-MBHA?Resin

按照步驟（2）的方法向Fmoc-Pro-Ser(tBu)-MBHA?Resin上依次連接Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Gly-OH，得到Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-MBHA?Resin。

2、合成Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-COOH

（1）合成Fmoc-Gly-2-CTC?resin

將2-chlorotrityl?chloride?resin用二氯甲烷溶脹后，加入二氯甲烷、Fmoc-Gly-OH、N,N′-二異丙基乙胺，在氮氣保護下，常溫攪拌1～3小時，得到Fmoc-Gly-2-CTCresin。

（2）合成Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-2-CTC?resin

按照步驟1中（2）的方法，向Fmoc-Gly-2-CTC?resin上依次連接Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH，得到Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-2-CTC?resin。

（3）切割處理