[發明專利]一種骨髓染色體G帶的制作方法

有效

• 申請號: 201310592341.8
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN103710434A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 程建兵;夏成青;陳紅梅;郭福曉;生帥
• 申請（專利權）人: 長沙艾迪康醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 杭州裕陽專利事務所(普通合伙) 33221
• 代理人: 江助菊

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，特別涉及一種G帶的制作方法，用于進行骨髓染色體核型分析。

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背景技術

G顯帶因為染色體主要是被Giemsa染料染色后而顯帶，故稱之為G顯帶技術，其所顯示的帶紋分布在整個染色體上。人們將用各種不同的方法，以及用不同的染料處理染色體標本后，使每條染色體上出現明暗相間，或深淺不同帶紋的技術稱為顯帶技術（banding?technique）。本世紀70年代以來，顯帶技術得到了很大發展，且在眾多的顯帶技術中（Q帶、G帶、C帶、R帶、T帶），G帶是目前被廣泛應用的一種帶型。

研究發現，人染色體標本經胰蛋白酶、Na0H、檸檬酸鹽或尿素等試劑處理后，再用Giemsa染色，可使每條染色體上顯示出深淺交替的橫紋，這就是染色體的G帶。每條染色體都有其較為恒定的帶紋特征，所以G顯帶后，可以較為準確的識別每條染色體，并可發現染色體上較細微的結構畸變。

近年來，隨著分子生物學與細胞遺傳學的發展，骨髓染色體核型分析在血液系統疾病的診斷、治療和預后中發揮了越來越重要的作用。骨髓染色體的制備因骨髓中有大量脂肪顆粒的干擾,?骨髓中各種細胞系的細胞周期不固定,?不統一,?難以區別對待而使得骨髓染色體分裂指數低,?染色體短粗,?分散度差，且成本較高。

因此，建立一種具有分裂相多、分散度好、帶紋清晰、長度適中等特征的骨髓G帶制作方法尤為重要。

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發明內容

本發明的目的是克服現有技術的缺陷，提供一種骨髓染色體G帶的制作方法，包括步驟：

??（1）配置骨髓培養基，所述培養基包括：其在基礎培養基中添加了青霉素/鏈霉素?、胎牛血清和人類淋巴瘤細胞培養物；其中：

???所述基礎培養基為RPMI1640培養基，各添加成分的用量為：

青霉素/鏈霉素????????????????????????????5-15ul/ml?

胎牛血清?????????????????????????????????60-140?ul/ml

人類淋巴瘤細胞培養物?????????????????????60-140?ul/ml

（2）接種：將骨髓細胞接種到步驟1所述的培養基中；

（3）終止培養：將溴化乙錠和秋水仙胺加入到步驟2所述的培養基中；

（4）收取骨髓細胞培養物；

（5）染色體標本制片：利用染料染色后獲得具有G顯帶的骨髓細胞染色體標本。

進一步地，青霉素選自10000U/ml，鏈霉素選自10000μg/ml。

進一步地，所述各添加成分用量為：

青霉素/鏈霉素?????????????????????????????8ul/ml?

胎牛血清?????????????????????????????????96?ul/ml

人類淋巴瘤細胞培養物?????????????????????96?ul/ml

進一步地，將骨髓細胞以1～3×10⁶個/ml的密度接種到所述的骨髓培養基中，放入37℃，5.0%CO₂培養箱培養24小時。

進一步地，以培養基用量為5ml計，加入50μl濃度為1.5～5.5mg/ml的溴化乙錠和25μl濃度為8～15μg/ml的秋水仙胺。

進一步地，以培養基用量為5ml計，加入50μl濃度為3mg/ml的溴化乙錠和25μl濃度為12μg/ml的秋水仙胺。

進一步地，培養基中加入溴化乙錠和秋水仙胺，搖晃均勻后37℃，5.0%CO₂培養箱孵育1小時。

進一步地，收取骨髓細胞培養物的方法包括：

??（1）?離心獲得骨髓細胞；

??（2）將步驟（1）中的骨髓細胞進行低滲處理；

??（3）將步驟（2）中的骨髓細胞用固定液進行預固定；

（4）將步驟（3）中的骨髓細胞用固定液固定；

（5）將固定后的骨髓細胞制成濃度適中的懸液用于G帶制片。

進一步地，染色體制片的方法包括：

???a．玻片的準備；

???b．滴片；

???c．烤片老化；

???d．配制消化液

e.?配制染色液；

???f．制片。

進一步地，所述的染色液的染料為Giemsa。

本發明的有益效果是：