[發(fā)明專利]一種骨髓染色體G帶的制作方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310592341.8
• 申請(qǐng)日: 2013-11-22
• 公開（公告）號(hào): CN103710434A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程建兵;夏成青;陳紅梅;郭福曉;生帥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長(zhǎng)沙艾迪康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 杭州裕陽專利事務(wù)所(普通合伙) 33221
• 代理人: 江助菊

1.一種骨髓染色體G帶的制作方法，包括步驟：

??（1）配置骨髓培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包括：其在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加了青霉素/鏈霉素?、胎牛血清和人類淋巴瘤細(xì)胞培養(yǎng)物；其中：

???所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為RPMI1640培養(yǎng)基，各添加成分的用量為：

青霉素/鏈霉素????????????????????????????5-15ul/ml?

胎牛血清?????????????????????????????????60-140?ul/ml

人類淋巴瘤細(xì)胞培養(yǎng)物?????????????????????60-140?ul/ml

（2）接種：將骨髓細(xì)胞接種到步驟1所述的培養(yǎng)基中；

（3）終止培養(yǎng)：將溴化乙錠和秋水仙胺加入到步驟2所述的培養(yǎng)基中；

（4）收取骨髓細(xì)胞培養(yǎng)物；

（5）染色體標(biāo)本制片：利用染料染色后獲得具有G顯帶的骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于，青霉素選自10000U/ml，鏈霉素選自10000μg/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述各添加成分用量為：

青霉素/鏈霉素????????????????????????????8ul/ml?

胎牛血清?????????????????????????????????96?ul/ml

人類淋巴瘤細(xì)胞培養(yǎng)物?????????????????????96?ul/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于，將骨髓細(xì)胞以1～3×10⁶個(gè)/ml的密度接種到所述的骨髓培養(yǎng)基中，放入37℃，5.0%CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于，以培養(yǎng)基用量為5ml計(jì)，加入50μl濃度為1.5～5.5mg/ml的溴化乙錠和25μl濃度為8～15μg/ml的秋水仙胺。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制作方法，其特征在于，以培養(yǎng)基用量為5ml計(jì)，加入50μl濃度為3mg/ml的溴化乙錠和25μl濃度為12μg/ml的秋水仙胺。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于，培養(yǎng)基中加入溴化乙錠和秋水仙胺，搖晃均勻后37℃，5.0%CO₂培養(yǎng)箱孵育1小時(shí)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于，收取骨髓細(xì)胞培養(yǎng)物的方法包括：

??（1）?離心獲得骨髓細(xì)胞；

??（2）將步驟（1）中的骨髓細(xì)胞進(jìn)行低滲處理；

??（3）將步驟（2）中的骨髓細(xì)胞用固定液進(jìn)行預(yù)固定；

?（4）將步驟（3）中的骨髓細(xì)胞用固定液固定；

（5）將固定后的骨髓細(xì)胞制成濃度適中的懸液用于G帶制片。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于，染色體制片的方法包括：

???a．玻片的準(zhǔn)備；

???b．滴片；

???c．烤片老化；

???d．配制消化液

e.?配制染色液；

???f．制片。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述的染色液的染料為Giemsa。