[發明專利]一種提取高純度藻藍蛋白的方法

有效

• 申請號: 201310592245.3
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN103613661A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 熊巍;劉海周;許瑞珂
• 申請（專利權）人: 云南藍鉆生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/795
• 分類號: C07K14/795;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/16
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊

技術領域

本發明涉及一種提取高純度藻藍蛋白的方法，屬于生物制品技術領域。

背景技術

藻藍蛋白是以螺旋藻等藻類為主要原料分離出的一種深藍色粉末。它既是一種蛋白質，又是一種極好的天然食用色素，同時又是良好的保健食品。藻藍蛋白是自然界中少見的色素蛋白之一，不僅顏色鮮艷，而且本身是一種營養豐富的蛋白質，其氨基酸組成齊全，必需氨基酸含量高。

目前，螺旋藻中藻藍蛋白的提取方法很多，但對藻藍蛋白的損失太多，提取率較低，很難進行大量提取，且容易造成產品二次污染，不宜推廣應用。因此，有必要研發一種提取率高、操作方便的藻藍蛋白提取方法。

發明內容

為解決現有技術中藻藍蛋白提取率低、難以推廣等問題，本發明提供一種提取高純度藻藍蛋白的方法，通過下列技術方案實現。

本發明提供的是這樣一種技術方案：一種提取高純度藻藍蛋白的方法，其特征在于經過下列各步驟：

（1）將新鮮或干燥的鈍頂螺旋藻的藻體制成螺旋藻粉；

（2）按螺旋藻粉:緩沖溶液?=?1:0.8～1:1.2的質量比，在步驟（1）的螺旋藻粉中加入緩沖溶液，攪勻，于-10～-20℃下凍藏12～24h，再在20～25℃下解凍完全后，在壓力為40～70MPa下進行高壓勻質破壁2～5次，得到螺旋藻破壁液；

（3）將步驟（2）所得螺旋藻破壁液經離心分離，取上清液，依次用2μm、0.45μm及0.2μm的微濾膜過濾上清液，得藻藍蛋白粗提液；

（4）將步驟（3）的藻藍蛋白粗提液以5～30mL/min的流速，通過組合型樹脂進行脫色純化，收集洗脫液，即為藻藍蛋白提取液，組合型樹脂的用量是螺旋藻粉體積的0.8～2.0倍；

（5）用羥基磷灰石體積的6～8倍量、濃度為0.1mol/L的磷酸鹽緩沖溶液，清洗羥基磷灰石色譜柱，再將步驟（4）所得藻藍蛋白提取液加到羥基磷灰石色譜柱中，靜置吸附20～30min后，用羥基磷灰石體積的5～6倍量、濃度為0.03mol/L、流速為2～5mL/min的磷酸鹽緩沖溶液進行洗脫，棄去洗脫液，再用羥基磷灰石體積的4～5倍量、濃度為0.03～0.045mol/L的磷酸鹽緩沖溶液洗脫羥基磷灰石色譜柱，收集洗脫液，即為藻藍蛋白精提液；

（6）將步驟（5）所得藻藍蛋白精提液用通透量為30～50KDa的膜進行脫鹽及濃縮，得到藻藍蛋白精提液濃縮物，然后將該濃縮物進行高速離心噴霧干燥，收集粉末，即得到高純度藻藍蛋白。

所述步驟（2）的緩沖溶液是pH為6～7、濃度為0.1M的磷酸鉀。

所述步驟（2）的高壓勻質破壁是在常規的高壓勻質機上完成的。

所述步驟（3）的離心分離是在轉速為3500～5000r/min的條件下離心分離20～30min。

所述步驟（4）的組合型樹脂為D900型離子交換樹脂、HPD-300L型樹脂、BEHP-3型大網孔非極性吸附樹脂、BEHP-4型大網孔非極性吸附樹脂、D112陽樹脂中的一種或幾種，且幾種的組合是任意的。

所述步驟（5）的磷酸鹽緩沖溶液是pH為6.75～6.95、含有0.05～0.15mol/L氯化鈉的磷酸鹽緩沖溶液。

所述步驟（6）的高速離心噴霧干燥是在加液速度為2～8L/h、進風溫度為180～320℃、出風溫度為80～90℃、干燥溫度為160～220℃的條件下進行的。

本發明具備的優點和效果：通過本發明能最大限度地提取藻藍蛋白，且產品不會被二次污染，本發明從破壁、分離純化，到干燥等步驟的操作均方便易行，操作性、可行性強，能實現規模化生產，生產過程中不排放污染物，是一種對環境友好的藻藍蛋白提取方法。藻藍蛋白在螺旋藻中的含量一般僅為3～10%，采用本發明從螺旋藻中提取高純度藻藍蛋白時，提取率為80.0%以上，產品純度達到A620/A280>4.0。

具體實施方式

下面通過實施例對本發明做進一步說明。

實施例1

（1）將新鮮的優質鈍頂螺旋藻（Arthrospira?platensis）的藻體除去雜質后，按常規制成螺旋藻粉；

（2）按螺旋藻粉:緩沖溶液=1:1的質量比，在步驟（1）的螺旋藻粉中加入pH為6.8、濃度為0.1M的磷酸鉀緩沖溶液，攪勻后，于-18℃下凍藏20h，再在20℃下解凍完全，然后送入高壓勻質機中，在55MPa壓力下進行高壓勻質破壁2次，得到螺旋藻破壁液；