[發(fā)明專利]一種提取高純度藻藍蛋白的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310592245.3 | 申請日： | 2013-11-22 |
| 公開（公告）號： | CN103613661A | 公開（公告）日： | 2014-03-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 熊巍;劉海周;許瑞珂 | 申請（專利權(quán)）人： | 云南藍鉆生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/795 | 分類號： | C07K14/795;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/16 |
| 代理公司： | 昆明正原專利商標代理有限公司 53100 | 代理人： | 徐玲菊 |
| 地址： | 650503 云南省昆明*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 提取 純度 蛋白 方法 | ||
1.一種提取高純度藻藍蛋白的方法，其特征在于經(jīng)過下列各步驟：
（1）將新鮮或干燥的鈍頂螺旋藻的藻體制成螺旋藻粉；
（2）按螺旋藻粉:緩沖溶液?=?1:0.8～1:1.2的質(zhì)量比，在步驟（1）的螺旋藻粉中加入緩沖溶液，攪勻，于-10～-20℃下凍藏12～24h，再在20～25℃下解凍完全后，在壓力為40～70MPa下進行高壓勻質(zhì)破壁2～5次，得到螺旋藻破壁液；
（3）將步驟（2）所得螺旋藻破壁液經(jīng)離心分離，取上清液，依次用2μm、0.45μm及0.2μm的微濾膜過濾上清液，得藻藍蛋白粗提液；
（4）將步驟（3）的藻藍蛋白粗提液以5～30mL/min的流速，通過組合型樹脂進行脫色純化，收集洗脫液，即為藻藍蛋白提取液，組合型樹脂的用量是螺旋藻粉體積的0.8～2.0倍；
（5）用羥基磷灰石體積的6～8倍量、濃度為0.1mol/L的磷酸鹽緩沖溶液，清洗羥基磷灰石色譜柱，再將步驟（4）所得藻藍蛋白提取液加到羥基磷灰石色譜柱中，靜置吸附20～30min后，用羥基磷灰石體積的5～6倍量、濃度為0.03mol/L、流速為2～5mL/min的磷酸鹽緩沖溶液進行洗脫，棄去洗脫液，再用羥基磷灰石體積的4～5倍量、濃度為0.03～0.045mol/L的磷酸鹽緩沖溶液洗脫羥基磷灰石色譜柱，收集洗脫液，即為藻藍蛋白精提液；
（6）將步驟（5）所得藻藍蛋白精提液用通透量為30～50KDa的膜進行脫鹽及濃縮，得到藻藍蛋白精提液濃縮物，然后將該濃縮物進行高速離心噴霧干燥，收集粉末，即得到高純度藻藍蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取高純度藻藍蛋白的方法，其特征在于：所述步驟（2）的緩沖溶液是pH為6～7、濃度為0.1M的磷酸鉀。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取高純度藻藍蛋白的方法，其特征在于：所述步驟（3）的離心分離是在轉(zhuǎn)速為3500～5000r/min的條件下離心分離20～30min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取高純度藻藍蛋白的方法，其特征在于：所述步驟（4）的組合型樹脂為D900型離子交換樹脂、HPD-300L型樹脂、BEHP-3型大網(wǎng)孔非極性吸附樹脂、BEHP-4型大網(wǎng)孔非極性吸附樹脂、D112陽樹脂中的一種或幾種，且?guī)追N的組合是任意的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取高純度藻藍蛋白的方法，其特征在于：所述步驟（5）的磷酸鹽緩沖溶液是pH為6.75～6.95、含有0.05～0.15mol/L氯化鈉的磷酸鹽緩沖溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取高純度藻藍蛋白的方法，其特征在于：所述步驟（6）的高速離心噴霧干燥是在加液速度為2～8L/h、進風(fēng)溫度為180～320℃、出風(fēng)溫度為80～90℃、干燥溫度為160～220℃的條件下進行的。
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