[發(fā)明專利]一種區(qū)別鴨圓環(huán)病毒和鵝圓環(huán)病毒的PCR-RFLP方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310591203.8
• 申請(qǐng)日: 2013-11-22
• 公開（公告）號(hào): CN103602759A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬(wàn)春和;黃瑜;陳紅梅;施少華;傅光華;程龍飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一種區(qū)別鴨圓環(huán)病毒和鵝圓環(huán)病毒的PCR-RFLP方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）提取鴨圓環(huán)病毒和鵝圓環(huán)病毒基因組DNA；

（2）用上游引物P1和下游引物P2同時(shí)對(duì)鴨圓環(huán)病毒和鵝圓環(huán)病毒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到相應(yīng)的Rep蛋白基因片段；上游引物P1和下游引物P2的序列分別為：

上游引物P1：5’-CATGATGGGCAGTGGCTTCCT-3’，

下游引物P2：5’-ACCTCCGTCTTCCAATCA-3’；

（3）取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)XhoⅠ酶切后進(jìn)行RFLP分析，可被酶切的為鵝圓環(huán)病毒，不可酶切的則為鴨圓環(huán)病毒。

2.根據(jù)權(quán)利要求書1中所述的區(qū)別鴨圓環(huán)病毒和鵝圓環(huán)病毒的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述的步驟（2）PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)膠回收大小為623bp；所述的步驟（3）中RFLP分析具體為：XhoⅠ酶切位點(diǎn)位于鵝圓環(huán)病毒Rep蛋白序列的309位，鵝圓環(huán)病毒可被XhoⅠ酶切后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)片段為2段，大小為364bp和259bp；而鴨圓環(huán)病毒基因組Rep蛋白基因中沒有XhoⅠ酶切位點(diǎn)，鴨圓環(huán)病毒經(jīng)XhoⅠ酶切后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)片段大小不變。