[發明專利]一種區別鴨圓環病毒和鵝圓環病毒的PCR-RFLP方法

有效

• 申請號: 201310591203.8
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN103602759A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 萬春和;黃瑜;陳紅梅;施少華;傅光華;程龍飛
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種區別鴨圓環病毒和鵝圓環病毒的PCR-RFLP方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）提取鴨圓環病毒和鵝圓環病毒基因組DNA；

（2）用上游引物P1和下游引物P2同時對鴨圓環病毒和鵝圓環病毒進行PCR擴增，得到相應的Rep蛋白基因片段；上游引物P1和下游引物P2的序列分別為：

上游引物P1：5’-CATGATGGGCAGTGGCTTCCT-3’，

下游引物P2：5’-ACCTCCGTCTTCCAATCA-3’；

（3）取PCR擴增產物經XhoⅠ酶切后進行RFLP分析，可被酶切的為鵝圓環病毒，不可酶切的則為鴨圓環病毒。

2.根據權利要求書1中所述的區別鴨圓環病毒和鵝圓環病毒的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述的步驟（2）PCR擴增產物經膠回收大小為623bp；所述的步驟（3）中RFLP分析具體為：XhoⅠ酶切位點位于鵝圓環病毒Rep蛋白序列的309位，鵝圓環病毒可被XhoⅠ酶切后經瓊脂糖凝膠電泳檢測片段為2段，大小為364bp和259bp；而鴨圓環病毒基因組Rep蛋白基因中沒有XhoⅠ酶切位點，鴨圓環病毒經XhoⅠ酶切后經瓊脂糖凝膠電泳檢測片段大小不變。