[發明專利]一種人羧酸酯酶CES2的高特異性熒光探針及其應用

有效

• 申請號: 201310587411.0
• 申請日: 2013-11-19
• 公開（公告）號: CN104650854A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發明（設計）人: 楊凌;馮磊;崔京南;葛廣波;劉兆明
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C07D311/30;C12Q1/44;G01N21/64;C12Q1/04
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 張晨

1.一種人羧酸酯酶CES2的高特異性熒光探針底物，其特征在于：該底物的酯鍵可被CES2特異性水解為相應水解產物并顯示與底物不同的發射波譜；

該底物為3-羥基黃酮酯類衍生物，其結構通式如式（1）所示，其中，R為苯基、對甲基苯基、對乙基苯基、對丙基苯基、對己基丙基、對硝基苯基、對氯苯基、1-奈基、2-呋喃基、2-噻吩基、（4-苯基）苯基、4-乙氧基苯基取代基中的一種。

2.權利要求1所述人羧酸酯酶CES2的高特異性熒光探針底物的應用，其特征在于：該底物作為CES2的特異性底物，可利用其水解反應活性，通過定量檢測單位時間內水解產物的生成量來測定不同酶源中CES2的活性。

3.按照權利要求2所述人羧酸酯酶CES2的高特異性熒光探針底物的應用，其特征在于：所述酶源為重組表達的CES2單酶、人或動物組織制備液、或各類組織細胞生物樣品。

4.按照權利要求2所述人羧酸酯酶CES2的高特異性熒光探針底物的應用，其特征在于：所述水解反應體系pH介于5.5～10.5之間；探針底物的濃度介于1/10～10Km之間；孵育體系反應溫度介于20～60℃之間，同時水解產物的轉化率應介于0.1%～20%之間。

5.按照權利要求2所述人羧酸酯酶CES2的高特異性熒光探針底物的應用，其特征在于：該探針底物及其水解產物均具有熒光屬性，可采用熒光檢測器實現產物及底物的快速靈敏檢測；熒光檢測條件為：激發波長308nm，在380～560nm進行熒光發射譜的檢測。

6.按照權利要求2所述人羧酸酯酶CES2的高特異性熒光探針底物的應用，其特征在于：該特異性探針底物及其水解反應可用于CES2抑制劑的快速篩選及抑制能力的定量評價。