[發明專利]一種測定殼聚糖與殼寡糖混合物的脫乙酰度的方法

在審

• 申請號: 201310587162.5
• 申請日: 2013-11-20
• 公開（公告）號: CN103983593A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 李鵬程;李儼;邢榮娥;劉松;于華華;李克成
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N1/38
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術領域

本發明屬于海洋化學工程技術，具體涉及一種測定殼聚糖與殼寡糖混合物的脫乙酰度的方法。

背景技術

殼聚糖是一個天然的線性多糖，由氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖通過β-1,4糖苷鍵連接而成。殼聚糖含量巨大且來源豐富，并且安全無毒具有良好的生物兼容性，在食品醫藥，農業，材料科學領域具有很大的應用潛力。殼寡糖是殼聚糖的降解產物。殼寡糖水溶性大大增加，且具有抗腫瘤，抗菌，抗炎，抗氧化等多種生理活性。

脫乙酰度是衡量殼聚糖和殼寡糖質量的重要指標。目前已有成熟的方法對殼聚糖的脫乙酰度進行檢測，但是對殼寡糖脫乙酰度的方法研究較少，且目前的方法都測不準殼寡糖的脫乙酰度，對于兩者混合物的脫乙酰度的檢測方法還沒見報道。隨著殼聚糖和殼寡糖產業的快速發展，大量的殼聚糖和殼寡糖混合物的產品問世，但是與之相關的脫乙酰度質量檢測方法還沒有對應的國家標準。因此，建立一種快速、方便并且準確的殼聚糖和殼寡糖混合物脫乙酰度的檢測方法，有利于對殼聚糖和殼寡糖混合物產品的質量監控，從而保障其產品質量。

發明內容

本發明的目的是提供一種測定殼聚糖與殼寡糖混合物的脫乙酰度的方法。

為實現上述目的，本發明采取以下設計方案：

一種測定殼聚糖與殼寡糖混合物的脫乙酰度的方法，將待檢測的樣品用稀鹽酸溶解，同時以全脫乙酰化殼寡糖為內標，分別測定在199nm的紫外光下吸光度，并根據標準曲線，得到樣品脫乙酰度。

具體為，

將殼聚糖與殼寡糖混合物樣品用稀鹽酸溶解，測定在199nm的紫外光下吸光度（A₂），采用全脫乙酰化殼寡糖為內標物測定在199nm的紫外光下吸光度（A₁），并以一系列濃度的N-乙酰氨基葡萄糖作為標準溶液，測定在199nm的紫外光下吸光度繪制的標準曲線，根據標準曲線以及A₁、A₂，得到待測樣品脫乙酰度。

所述出標準曲線繪制，將N-乙酰氨基葡萄糖溶液用0.001mol/L的HCl稀釋成0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.03mg/mL、0.04mg/mL、0.05mg/mL的標準溶液，以0.001mol/L?HCl為參比液，分別測定不同濃度下的標準溶液在199nm處的吸光度，而后根據濃度與吸光度繪制出曲線。

所述內標物紫外光下吸光度的測定，稱取全脫乙酰化樣品，用0.001mol/L?HCl溶解后，以0.001mol/L?HCl為參比液，測定其在199nm處的吸光度A₁。

所述檢測的樣品可為殼聚糖與殼寡糖的混合物樣品、殼聚糖樣品或殼寡糖樣品。

而后，將A1和A2分別帶入標準曲線中，得到樣品中的乙酰基濃度，從而求得脫乙酰度，即D.D./%=100%-(樣品中乙酰基濃度/樣品濃度)×100%，以全脫乙酰化殼寡糖為內標，可以計算得到檢測結果的相對誤差。

本發明所具有的優點：

1.本發明可以快速準確的測定殼聚糖與殼寡糖混合物的脫乙酰度，并以全脫乙酰化殼寡糖為內標品，得到測定結果的相對誤差，保證測定結果的準確性。

2.本發明利用紫外光譜法進行測定，所需時間短，結果準確。

具體實施方式

本發明的保護范圍不僅局限于以下實施例。

實施例1：

待測樣品為某公司殼聚糖與殼寡糖混合物保健產品。

將N-乙酰氨基葡萄糖溶液用0.001mol/L的HCl稀釋成0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.03mg/mL、0.04mg/mL、0.05mg/mL的標準溶液，以0.001mol/L?HCl為參比液，在199nm處測定標準系列溶液的吸光度，繪制出標準曲線為y=22.33x-0.0389，R=0.9984。

配制一定濃度的全脫乙酰化殼寡糖，以0.001mol/L?HCl為參比液，測定其在199nm處的吸光度A1。

配制一定濃度的殼聚糖和殼寡糖混合物樣品，以0.001mol/L?HCl為參比液，測定其在199nm處的吸光度A₂。

將A₁和A₂分別帶入標準曲線中，得到樣品中的乙酰基濃度，從而求得脫乙酰度，即D.D./%=100%-(樣品中乙酰基濃度/樣品濃度)×100%，以全脫乙酰化殼寡糖為內標，可以計算得到檢測結果的相對誤差，即誤差/%=（內標品脫乙酰度測量值-內標品脫乙酰度）/內標平脫乙酰度×100%。結果參見表1。