[發(fā)明專(zhuān)利]粉葛組織培養(yǎng)快速育苗方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310585519.6
• 申請(qǐng)日: 2013-11-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103598098A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鐘宇;張魯;余長(zhǎng)春;鄭陽(yáng)霞;萬(wàn)學(xué)琴;張健;李賢偉;馮茂松
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 北京眾合誠(chéng)成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)領(lǐng)域，一種粉葛組織培養(yǎng)快速育苗方法。

背景技術(shù)

粉葛（Puerariae?lobata?var.Thomsonii）,為豆科（Leguminosae）葛屬（Pueraria）植物。在我國(guó)有8種及2變種，主要分布于西南部、中南部至東南部，長(zhǎng)江以北少見(jiàn)。粉葛的食用部分為塊根，俗稱(chēng)“葛根”。

葛根是我國(guó)衛(wèi)生部認(rèn)定的藥食兩用的山地植物。葛根味甘，辛，性平，具有解肌退熱、生津、透疹、升陽(yáng)止瀉之功；葛根素（異黃酮類(lèi)化合物）含量高，具有降低血壓、降低心肌耗氧量、減慢心率、擴(kuò)張冠血狀管改善正常和缺血心肌的代謝，改善腦循環(huán)和外周循環(huán)等作用。隨著現(xiàn)代醫(yī)藥、食品科技的不斷發(fā)展，葛根的藥理、藥化、臨床應(yīng)用、食品開(kāi)發(fā)研究等發(fā)面的不斷深入，其使用價(jià)值越來(lái)越引起人們的關(guān)注，被譽(yù)為“亞洲人參”。世界糧農(nóng)組織等權(quán)威機(jī)構(gòu)預(yù)測(cè)，全球葛根需求量將至5000萬(wàn)噸/年（折合2000萬(wàn)畝）。

此外，粉葛淀粉含量高，一些優(yōu)良品種淀粉含量可高達(dá)25%，7.5kg鮮粉葛即可生產(chǎn)燃料乙醇1kg。單位面積土地的乙醇生產(chǎn)率粉葛高于玉米、甘薯等糧食作物，而且粉葛生物固氮效率高，耐貧瘠，具有充分挖掘土地潛力的優(yōu)勢(shì)。粉葛作為非糧食生物質(zhì)新材料，避免了“與民爭(zhēng)糧，與糧爭(zhēng)地”的瓶頸，具有巨大的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。

大巴山粉葛（Pueraria?lobata(wild)Ohwi'Dabashan'）是由達(dá)州市林業(yè)科技推廣站從野生葛品種中馴化的良種，2010年通過(guò)四川省林木品種審定委員會(huì)審定（登記編號(hào)為：川R-WTS-PL-023-2009），成為秦巴山區(qū)發(fā)展粉葛產(chǎn)業(yè)主推的主導(dǎo)品種，發(fā)展面積增長(zhǎng)迅速，對(duì)種苗需求量大。

目前大巴山粉葛的繁殖主要以壓條和扦插繁殖傳統(tǒng)方法為主，繁殖系數(shù)低，獲得的種苗數(shù)量有限，無(wú)法滿足當(dāng)前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的需求，如何提供大量?jī)?yōu)質(zhì)的種苗成為當(dāng)前亟待解決的問(wèn)題。

植物組織培養(yǎng)快速繁殖是當(dāng)代農(nóng)業(yè)生物技術(shù)在生產(chǎn)上應(yīng)用最廣泛、產(chǎn)生經(jīng)濟(jì)效益最大的一個(gè)領(lǐng)域。組織培養(yǎng)快速繁殖種苗具有其獨(dú)特的優(yōu)越性，首先繁殖系數(shù)大，能以比常規(guī)方法快數(shù)千到數(shù)百萬(wàn)倍的速度進(jìn)行擴(kuò)大繁殖，及時(shí)提供大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗，使一個(gè)新的品種能夠在短時(shí)間內(nèi)滿足生產(chǎn)的需要，加速引種和良種的推廣進(jìn)程；使用的繁殖材料小和少；繁殖苗木整齊一致，商品性高，能夠保持原品種的優(yōu)良特性；可進(jìn)行周年工廠化育苗，生產(chǎn)效率高。對(duì)一些繁殖系數(shù)低、不能用種子繁殖（無(wú)種子或種子繁殖后代出現(xiàn)種性的衰退）的植物品種的繁殖，利用組織培養(yǎng)快速繁殖更為重要。

目前，雖然已有葛屬京西葛、粉葛、美國(guó)葛藤、泰國(guó)葛和野葛幾個(gè)品種的組織培養(yǎng)育苗技術(shù)專(zhuān)利與報(bào)道發(fā)表，但不同物種，甚至同一物種、不同品種之間，其組織培養(yǎng)方法也有很大的差異性。大巴山粉葛是一個(gè)新品種，還尚無(wú)組織培養(yǎng)快速育苗的報(bào)道。而且，粉葛組織培養(yǎng)還存在這一些問(wèn)題：野外取材很難保證母本的遺傳品質(zhì)；粉葛葛藤上絨毛多，污染率高，難以建立無(wú)菌體系；增殖率低。因此，尋求并探索大巴山粉葛組織培養(yǎng)快速繁殖育苗技術(shù)，是擴(kuò)大大巴山粉葛種源生產(chǎn)，解決生產(chǎn)中種苗需求的迫切任務(wù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種粉葛組織培養(yǎng)育苗方法，利用組織培養(yǎng)技術(shù)，提高粉葛的繁殖系數(shù)，培育出遺傳性狀穩(wěn)定的粉葛無(wú)性系。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種粉葛組織培養(yǎng)快速育苗方法，包括如下步驟：

（1）預(yù)處理將優(yōu)株塊根進(jìn)行盆栽，放置在溫室大棚中，待其發(fā)出芽藤蔓長(zhǎng)至20cm，開(kāi)始噴灑1%多菌靈溶液，每周一次，持續(xù)一個(gè)半月，藤蔓長(zhǎng)至1m時(shí)開(kāi)始取材；

（2）無(wú)菌材料體系的建立選取當(dāng)年生粉葛葛藤，剪去葉片和葉柄，切割成1.0～1.5cm長(zhǎng)帶有腋芽的莖段，將帶芽莖段置于自來(lái)水下沖洗30min，然后用洗衣粉液浸泡10～30min，用軟刷刷洗莖段后再置流水下沖洗1～2h，在超凈工作臺(tái)上，將洗滌好的莖段用質(zhì)量濃度為75％酒精浸泡15～20s，無(wú)菌水沖洗2～4次，然后用0.1％的氯化汞浸泡3～5min，無(wú)菌水沖洗4～6次再用2%次氯酸鈉處理8～10min，無(wú)菌水沖洗4～6次，用濾紙吸干帶芽莖段獲得無(wú)菌材料；

（3）誘導(dǎo)培養(yǎng)將上述步驟獲得的無(wú)菌帶芽莖段先接種到1/2MS培養(yǎng)基上，黑暗條件下培養(yǎng)10～15d，減少褐化發(fā)生，然后轉(zhuǎn)入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上促進(jìn)腋芽的萌發(fā)和生長(zhǎng)，按光照和黑暗時(shí)間比為2:1交替進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)；

（4）芽的增殖芽誘導(dǎo)培養(yǎng)25±2d，腋芽萌發(fā)生長(zhǎng)至1～1.5cm，將其全部轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基進(jìn)行反復(fù)增殖，獲得大量的增殖苗后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)；