[發明專利]多肽藥物DiaPep277 的合成方法

在審

• 申請號: 201310585416.X
• 申請日: 2013-11-19
• 公開（公告）號: CN104650209A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發明（設計）人: 張文治;劉建;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 馬潔;張廣育

技術領域

本發明涉及一種多肽的合成方法，更具體而言，涉及DiaPep277的合成方法。?

背景技術

以色列安多米達生物技術公司的合成肽——DiaPep277是源自人熱休克蛋白60序列上的一段含24個氨基酸的肽段，其序列如下：?

H-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Val-Ala-Leu-Leu-Arg-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-Thr-Pro-Ala-Asn-Glu-Asp-OH?

多項臨床前試驗結果顯示，DiaPep277能通過誘導Th2和Treg的產生來抑制致糖尿病免疫反應，從而有效阻止β細胞的破壞，并保留其胰島素分泌功能，進而有可能改善血糖控制，減少胰島素用量。更重要的是，DiaPep277的免疫調節作用具有特異性，不會干擾其他免疫功能，因此在臨床試驗中表現出極佳的安全性。這種藥物可以明顯提高I型糖尿病患者的生存質量，延緩或阻止各種并發癥的發生，以提高患者的預期壽命。目前，FDA已授予DiaPep277孤兒藥地位，用于治療有殘余β細胞功能的I型糖尿病患者。?

鑒于DiaPep277在治療I型糖尿病中的特殊地位和廣泛的應用前景，其合成方法的開發也變得日趨緊要。由于DiaPep277肽段中存在大量的疏水殘基，會引起樹脂收縮嚴重，如采用標準的固相逐步偶聯縮合技術難以順利偶聯，導致純度很低，特別是偶聯片段Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Val時容易產生缺損肽及增加或減少Gly的雜質。?

因此，需要開發一種新的合成DiaPep277的方法，其具有改進的純度和收率。?

發明內容

針對現有技術的不足，本發明通過采用片段固相縮合手段，可有效的避免樹脂收縮帶來的偶聯不完全的缺損肽及增加或減少Gly的雜質，進?而提高DiaPep277粗肽的純度與收率。?

本發明的目的是提供一種DiaPep277的合成方法，具體提供一種DiaPep277的片段固相合成方法，其包括下述步驟：?

（1）以王樹脂或2-CTC樹脂為載體合成Fmoc-Asp(OtBu)-樹脂，然后采用固相多肽合成方法將其從C端到N端逐一偶聯氨基酸、然后脫除Fmoc保護基，得到肽樹脂A:?

H-Val-Ala-Leu-Leu-Arg(pbf)-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Pro-Ala-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-樹脂；?

（2）以2-CTC樹脂為載體合成Fmoc-Gly-2-CTC樹脂，然后采用固相多肽合成方法將其從C端到N端逐一偶聯氨基酸，得到肽樹脂B:Fmoc-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-2-CTC樹脂；?

（3）將肽樹脂B進行裂解，得多肽片段b:?

Fmoc-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-OH；?

（4）將多肽片段b與肽樹脂A進行固相偶聯得到肽樹脂C：?

Fmoc-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Val-Ala-Leu-Leu-Arg(pbf)-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Pro-Ala-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-樹脂；?

（5）將肽樹脂C裂解得到DiaPep277：?

H-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Val-Ala-Leu-Leu-Arg-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-Thr-Pro-Ala-Asn-Glu-Asp-OH。?

本發明的DiaPep277的片段固相合成方法相對于傳統的固相逐步偶聯縮合法不僅保持了操作簡便、后處理容易等優點，還具有收率高、純度好的優勢，為DiaPep277的大規模生產提供了一種全新的思路。?

具體實施方式

術語解釋?

本文通篇的術語“固相多肽合成方法”、“固相偶聯”是指多肽合成領域已知的Fmoc固相合成方法，例如記載于Fmoc?Solid?Phase?Peptide?Synthesis:A?Practical?Approach,W.C.Chan,Peter?D.White?著，March2,2000（ISBN-10:0199637245）,英國Oxford?University?Press。?