[發明專利]多肽藥物DiaPep277 的合成方法

在審

• 申請號: 201310585416.X
• 申請日: 2013-11-19
• 公開（公告）號: CN104650209A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發明（設計）人: 張文治;劉建;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 馬潔;張廣育

1.一種合成DiaPep277的方法，包括下述步驟：

（1）以王樹脂或2-CTC樹脂為載體合成Fmoc-Asp(OtBu)-樹脂，然后采用固相多肽合成方法將其從C端到N端逐一偶聯氨基酸、然后脫除Fmoc保護基，得到肽樹脂A:

H-Val-Ala-Leu-Leu-Arg(pbf)-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Pro-Ala-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-樹脂；

（2）以2-CTC樹脂為載體合成Fmoc-Gly-2-CTC樹脂，然后采用固相多肽合成方法將其從C端到N端逐一偶聯氨基酸，得到肽樹脂B:Fmoc-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-2-CTC樹脂；

（3）將肽樹脂B進行裂解，得多肽片段b:

Fmoc-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-OH；

（4）將多肽片段b與肽樹脂A進行固相偶聯得到肽樹脂C：

Fmoc-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Val-Ala-Leu-Leu-Arg(pbf)-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Pro-Ala-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Asp(OtBu)-樹脂；

（5）將肽樹脂C裂解得到DiaPep277：

H-Val-Leu-Gly-Gly-Gly-Val-Ala-Leu-Leu-Arg-Val-Ile-Pro-Ala-Leu-Asp-Ser-Leu-Thr-Pro-Ala-Asn-Glu-Asp-OH。

2.權利要求1的方法，其中，步驟（1）中的樹脂為王樹脂；所得的Fmoc-Asp(OtBu)-樹脂的替代度為0.4～0.7mmol/g。

3.權利要求1的方法，其中，步驟（2）中所述2-CTC樹脂的替代度范圍為0.6～1.2mmol/g，優選為0.8～1.0mmol/g。

4.權利要求1的方法，其中，步驟（1）和（2）中的固相多肽合成方法在偶聯劑的存在下進行，所用的偶聯劑為以下成分的組合物：DIPCDI和HOBt；PyBOP、HOBt和DIPEA；TBTU、HOBt和DIPEA；或HBTU、HOBt和DIPEA。

5.權利要求1的方法，其中，步驟（1）和（2）中的固相多肽合成方法在偶聯劑的存在下進行，所用的偶聯劑為DIPCDI和HOBt的組合物，其中各成分的比例以摩爾比計為DIPCDI:HOBT=1:1～1.2。

6.權利要求1的方法，其中，步驟（4）中的固相偶聯在偶聯劑的存在下進行，所用的偶聯劑為以下成分的組合物：PyBOP、HOBT和DIPEA；PyBOP和DIPEA；DIPCDI和HOAT；或DIPCDI和HOBT。

7.權利要求1的方法，其中，步驟（4）中的固相偶聯在偶聯劑的存在下進行，所用的偶聯劑為PyBOP、HOBT和DIPEA的組合物，其中偶聯劑中各成分的比例以摩爾比計為PyBOP：HOBT：DIPEA=1.0:1.2:2.0。

8.權利要求1的方法，其中，步驟（3）中的裂解過程在裂解液的存在下進行，所述裂解液為以體積計為TFE：DCM=1:99的混合物。

9.權利要求1的方法，其中，步驟（5）中的裂解過程在裂解液的存在下進行，所述裂解液為以體積計為TFA：TIS：H₂O=95：5：5的混合物。

10.權利要求1-9中任一項的方法，還包括DiaPep277的純化步驟，所述純化步驟采用反相高壓液相色譜法，包括：以反相十八烷基硅烷為固定相，以0.2%三氟乙酸/乙腈為流動相，收集目的峰餾分，濃縮凍干。