[發明專利]一種鹽酸多柔比星脂質體包封率的測定方法

有效

• 申請號: 201310585408.5
• 申請日: 2013-11-19
• 公開（公告）號: CN103630508A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 朱瑤俊;賀明;符俊;代光玉
• 申請（專利權）人: 常州金遠藥業制造有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/33
• 代理公司: 常州市英諾創信專利代理事務所(普通合伙) 32258
• 代理人: 王美華;任曉嵐

技術領域

本發明屬于化學藥品檢測領域，特別涉及一種關于鹽酸多柔比星脂質體包封率的測定方法。

背景技術

包封率是脂質體和納米粒質量控制的一個重要的指標，反映了藥物被載體包封的程度，藥物和載體的濃度，制備過程中的條件是影響其包封率的主要因素。包封率包括百分包封率和包裹容積的測定，一般文獻主要考察百分包封率(Encapsulation?percentage,EN%)。其表達式是EN%=(1－Cf／Ct)×100％。式中Cf為游離藥物的量；Ct為納米粒或脂質體懸液中藥物的總量。為準確測定包封率，將納米粒或脂質體和游離藥物分離是關鍵的步驟。由于脂質體或納米粒比被包裹的藥物粒子要大的多，可以利用它們的大小不同來分離除去未包裹的藥物，這些方法有凝膠過濾柱層析法、滲析法等；如果被包裹的藥物是蛋白質或DNA等，或未被包裹的藥物可能形成較大的聚結物，則可以利用它們與納米粒或脂質體浮力、密度不同而采用離心等方法進行分離。常見包封率檢測方法如下：

1.柱層析法

凝膠滲透層析技術因其有效且快速而在實驗室得到廣泛應用。它可用于分離除去未包裹藥物也可以對懸液中的脂質體或納米粒大小分組。應注意的是脂質體或納米粒被洗脫介質稀釋后可能需要增加濃縮步驟。柱層析填料常用葡聚糖如Sephadex?G-50，也有文獻報道使用Sephadex?G-25和Sephadex?G-200，具體步驟為：在層析柱中裝入用水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液溶脹的Sephadex?G-50，將混懸液上柱，用水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液控制流速洗脫。選用凝膠的粒徑大小、洗脫液的種類、洗脫的速度、溫度對分離有重要的影響，在具體的實驗中需要作出洗脫曲線以確定最佳的分離效果。

韓靜等人在測定降香揮發油固體脂質納米粒的包封率時采用柱層析法分離。條件是：Sephadex?G-50柱（16cm×2cm），洗脫液為蒸餾水，流速為1ml／min，室溫。移取降香揮發油固體納米粒0.5ml上柱，以柱層析條件洗脫，每3ml收集一次。被包封的藥物量應用含藥量測定的HPLC條件測定。

何軍等人將溶脹12小時的Sephadex?G-25裝柱，用80ml水洗脫，流速1ml／min，收集后40ml洗脫液進行測定(2)。紫杉醇長循環脂質納米粒的包封率測定同樣選用Sephadex凝膠柱，用水為洗脫液，接取其中帶有藍色乳光的部分測定。

欒立標等在測定酮洛芬明膠微球包封率時發現凝膠柱層析法除有準確、方便、微粒不易破壞、重現性好等優點外，還可以純化微球，不僅可以除去未包裹的藥物、無機鹽等低分子量雜質，而且也可以分離出吐溫-20。

高曉黎等對葡聚糖凝膠色譜法測定脂質體包封率的條件進行了篩選。對玻璃色譜柱，凝膠的粒徑并不是越小越好，若凝膠顆粒太細，較大的脂質體可能被滯留在凝膠柱上，選用時要考慮被分離化合物的分子大小和性質。對于多層脂質體宜選用中粗級的凝膠（粒徑大小50－150μm），而對于小單層脂質體則可以用任何級別的凝膠。在柱色譜過程中，所用的色譜柱的徑高比，洗脫液的流速以及上樣量的多少均影響從脂質體中分離游離藥物，宜選擇能使脂質體達到最大分離程度的洗脫條件，才能保證準確的包封率。還應注意的是葡聚糖表面存在著能與脂質體膜結合并相互作用的微小部位。雖然這種作用并不影響脂質體在凝膠柱上的流動特性，但仍可導致少量脂質的損失，使膜不穩定性增加，從而導致膜滲透性的改變及包裹物質的滲漏。這種現象在脂質濃度較低的情況下應予以特別的注意，一般可通過加大脂質體樣品上柱量或用空脂質體預先將柱子飽和來解決。

2.滲析法

滲析法是利用脂質體或納米粒粒子和藥物分子大小不同，通過半透膜材料的膜孔截留作用將游離藥物除去的方法。脂質體和納米粒較大不能透過半透膜，而游離藥物可以通過，一般把脂質體和納米粒放在半透膜內，常用的半透膜材料有羊皮紙，動物膀胱和火棉膠等。膜外放純溶劑，由于濃度差因素，膜內的游離藥物不斷向膜外滲透，經常更換膜外的溶劑，使游離藥物被完全分離出來。此法是最簡單的也是最常用的除去未包封藥物的方法（大分子化合物除外）。它不需要復雜的技術，也無需昂貴的儀器，且能夠擴大生產。通過不斷改換滲析介質可除去所有的游離藥物。但此法很費時，一般室溫條件下，要除去95％以上的游離藥物至少需要更換三次滲析介質，時間在10－24h以上。此外，滲析介質的滲透強度應與脂質體或納米粒懸液的濃度一致，否則在滲析中就會改變脂質體和納米粒懸液的體積，且可能引起包裹物質的滲漏。