[發明專利]一種用于豹紋鰓棘鱸鑒別的引物對和探針、試劑盒及檢測方法

無效

• 申請號: 201310585155.1
• 申請日: 2013-11-20
• 公開（公告）號: CN103589802A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 陳雙雅;張永祥;李宏;王嘉鶴;陳偉玲;周昱
• 申請（專利權）人: 陳雙雅
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廈門市誠得知識產權代理事務所(普通合伙) 35209
• 代理人: 尤懷成

1.一種用于實時熒光PCR方法鑒別豹紋鰓棘鱸的引物對和探針，其特征在于，所述引物對F289和R380，其序列分別為SEQ?ID?No：1和SEQ?ID?No：2所示的序列，所述探針P309的序列為SEQ?ID?No：3所示的序列，在探針序列的5’端連接有一個熒光報告基團FAM，3’端連接有一個熒光淬滅基團TAMRA。

2.一種用于實時熒光PCR方法鑒別豹紋鰓棘鱸的試劑盒，其特征在于：含有權利要求1所述引物對和探針的試劑盒。

3.權利要求1的引物對和探針、權利要求2的試劑盒用于鑒別豹紋鰓棘鱸的用途。

4.用于豹紋鰓棘鱸鑒別的實時熒光PCR檢測方法，其中所述實時熒光PCR方法為Taqman熒光探針法，其特征在于：包括用權利要求1的引物對和探針，或者權利要求2試劑盒中的引物對和探針進行實時熒光PCR擴增的步驟。

5.權利要求4所述的用于豹紋鰓棘鱸鑒別的實時熒光PCR檢測方法，其特征在于：

從樣品中提取DNA為模板；

利用權利要求1的引物對和探針，或者權利要求2試劑盒中的引物對和探針，進行實時熒光PCR擴增；

對擴增曲線進行分析，并作出判斷。

6.權利要求4或5所述方法，其特征在于：所述的實時熒光PCR擴增反應體系為25?μL，即在0.2?mL的PCR反應管中加入12.5?μL?2×PCR?Taqman實時熒光PCR預混液，1?μL?10?μmol/L的上游引物F289，1?μL?10?μmol/L的下游引物R380，1?μL?10?μmol/L的探針P309，5?μL樣品基因組DNA，4.5?μL雙蒸水。

7.?權利要求4或5所述方法，其特征在于：所述的實時熒光PCR擴增反應條件為：95?℃?10?min；95?℃?15?s，64?℃?35?s，共35個循環。

8.權利要求4或5所述方法，其特征在于：所述的結果分析并作出判斷是樣品出現典型的特異性擴增曲線且Ct值小于35即判斷為檢出豹紋鰓棘鱸。