[發明專利]一種糖鏈抗原125定量檢測試劑盒及其應用

無效

• 申請號: 201310582689.9
• 申請日: 2013-11-19
• 公開（公告）號: CN103675278A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 穆海東;汪寧梅;沈玨璟;劉洵言;佐一含;高學武
• 申請（專利權）人: 上海裕隆醫學檢驗所股份有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/535;G01N35/00
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 徐槐

技術領域

本發明涉及的是糖鏈抗原125的檢測方法，具體的是應用糖鏈抗原125定量檢測試劑盒進行檢測的方法。?

背景技術

人體血清中糖鏈抗原125（CA125）是上皮性卵巢癌的主要標志物，特異性能達到80%以上，在卵巢腫瘤復發的早期比臨床提前幾個月即出現濃度增高，因此其濃度是用來評估卵巢癌的重要指標，對于已經過組織學確診的卵巢癌患者，CA125濃度的檢測有助于對治療效果和疾病進行檢測并可用于協助判斷預后，但需要說明的是，其他因素也會引起血清CA125的增高，比如1%的健康婦女、3%的良性卵巢腫瘤患者和6%的非卵巢相關的良性疾病患者。

酶聯免疫法是一種免疫檢測方法，其基礎手段是抗原或抗體的固相化結合抗原或抗體的酶標記，在加入酶反應底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，從而能實現目的檢測物的定性或定量分析。

實驗階段的酶聯免疫法進行CA125濃度檢測普遍具有良好的靈敏度、準確度和再現性，但是實際臨床檢查過程中，由于大批量操作的采用(例如應用生物芯片檢測儀的過程中),使得上述指標都有不同程度的減弱，此外，目前普遍采用的PMT檢測器為點測量，且其工作前須進行波峰校正，不僅工作效率與大批量操作的要求相悖，更易導致結果的不準確性。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題，就是針對現有技術所存在的不足，而提供一種靈敏度、準確度高，再現性好的技術方案，該方案采用雙抗體夾心酶聯免疫化學發光法的原理，制備了一種糖鏈抗原125定量檢測試劑盒，其應用于大批量檢測和逐個/組手動檢測中，都表現出靈敏度、準確度高，再現性好的有益效果。

本發明的一種糖鏈抗原125定量檢測試劑盒及其應用，技術方案為，該試劑盒包括有CA125抗體包被微孔反應板/條、校準品、質控品、酶結合物、濃縮洗滌液、發光底物A和發光底物B。

所述的微孔反應板/條上抗體的包被濃度為1～3μg/孔。所述的校準品為CA125的抗原稀釋液，其濃度范圍分別為5、15、50、100、300、600U/ml，所述的質控品為CA125的稀釋液。所述的酶結合物為辣根過氧化物酶標記的CA125抗體溶液，其含量為0.2～1ug/mL。所述的濃縮洗滌液為含有吐溫-20的20%NaCl溶液，吐溫-20含量為0.01%-0.1%。所述的發光底物A為魯米諾溶液，所述發光底物B為過氧化氫酶和辣根過氧化氫酶穩定劑的混合溶液。

所述的糖鏈抗原125定量檢測試劑盒的應用，包括以下步驟：

a．完成待測樣品預處理后，取出所需的CA125抗體包被的微孔反應板/條置于微孔架上，立即將剩余的微孔反應板/條放回鋁箔袋中，并重新密封鋁箔袋；

b．加入校準品每孔25～100uL、質控品每孔25～100?uL和待測樣本每孔25～100?uL，然后再加入酶結合物每孔50～150uL，充分混勻，取出濃縮洗滌液用新鮮的純化水1：20稀釋后加入相應的存放裝置；

c.?選擇芯片反應儀elisa，選擇洗滌微孔條數，放置微孔板于反應槽內，反應開始；

d．反應儀自動洗滌完成，拿出微孔架，拍干；

e．從試劑盒中取出發光底物液A和發光底物液B，將二液等體積混合并混勻，加發光底物液每孔50μl，全部加完發光底物液后，立即計時，在1分鐘內將微孔板條平穩放置于生物芯片檢測儀中，啟動CCD拍照程序，設置曝光時間90秒，1分鐘整拍照；

f．計算機自動處理和分析資料，出報表。

CA125檢測試劑盒的應用具體為：

1、前期準備

（1）將試劑盒置室溫（18～26℃）平衡20分鐘。

（2）從試劑盒中取出濃縮洗滌液，用新鮮的純化水1：20稀釋后加入

相應的存放位置。

（3）使用前將待測的合格血清樣本置于室溫18～26℃平衡20分鐘。

2、試驗條件

在室溫（18～26℃）下進行操作。

3、操作步驟

使用生物芯片反應儀操作步驟

①取出所需的CA12-5抗體包被微孔板反應條置于微孔架上，立即將剩余的微孔反應條放回鋁箔袋中，并重新密封鋁箔袋。

②校準品每孔25～100uL、質控品每孔25～100?uL和待測樣本每孔25～100?uL，然后再加入酶結合物每孔50～150uL，充分混勻。