[發(fā)明專利]一種簡便測定乳制品中非蛋白質(zhì)的含氮物質(zhì)含量的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310582127.4
• 申請(qǐng)日: 2013-11-15
• 公開（公告）號(hào): CN103575686A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋健;趙泳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/33
• 分類號(hào): G01N21/33;G01N21/78;G01N31/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

乳制品中中總氮物質(zhì)可用凱氏定氮法測定，總蛋白質(zhì)含量可用比色法測定，并和凱氏定氮法的數(shù)據(jù)進(jìn)行校正，兩者扣除后，可得到乳制品中非蛋白質(zhì)的含氮物質(zhì)含量，使其得到更好的利用于食品、醫(yī)藥和保健品等領(lǐng)域。

背景技術(shù)

中國乳制品行業(yè)起步晚，起點(diǎn)低，但發(fā)展迅速。特別是改革開放以來，奶類生產(chǎn)量以每年兩位數(shù)的增長幅度迅速增加，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于1％的同期世界平均水平。中國乳制品產(chǎn)量和總產(chǎn)值在最近的10年內(nèi)增長了10倍以上，已逐漸吸引了世界的眼光。但同時(shí)，中國人均奶消費(fèi)量與發(fā)達(dá)國家相比，甚至與世界平均水平相比，差距都還十分懸殊。改革開放以來，中國奶業(yè)走上了發(fā)展的快車道，進(jìn)入快速增長期。奶類生產(chǎn)始終保持著高速增長勢頭。

牛乳含有幾乎人體所需的全部營養(yǎng)素及具有保健功能的生物活性物質(zhì)，營養(yǎng)價(jià)值非常豐富，特別是對(duì)青少年的健康成長起了重要作用。同時(shí)，也對(duì)牛奶、奶粉等乳制品的質(zhì)量安全提出了更高的要求。

蛋白質(zhì)是乳制品最重要的營養(yǎng)成分，是乳制品作為營養(yǎng)補(bǔ)充劑的根本指標(biāo)，對(duì)蛋白質(zhì)含量的檢測是控制乳產(chǎn)品質(zhì)量的重要手段。但是，由于現(xiàn)行的測定乳制品的方法是凱氏定氮法，測定的是總的含氮量，這給不法分子以可乘之機(jī)，可以在產(chǎn)品中加入尿素、三聚氰胺等高含氮的物質(zhì)，以冒充蛋白質(zhì)。最近，發(fā)生的三聚氰胺奶粉事件，給少年兒童的健康造成了極大的損害，因此，建立一種能甄別摻假的非蛋白質(zhì)的含氮物質(zhì)含量的測定方法是十分必要的。

眾所周知，現(xiàn)行的蛋白質(zhì)測定方法是凱氏定氮法，其基本原理是：食品(以及所有含氮化合物)經(jīng)加入硫酸消化使蛋白質(zhì)和各種含氮化合物分解，其中氮素與硫酸化合成硫酸銨。然后加堿蒸餾使氨游離，用硼酸液吸收后，再用鹽酸或硫酸滴定根據(jù)鹽酸消耗量，再乘以換算系數(shù)即為蛋白含量。該方法準(zhǔn)確度較高，并且由于歷史的原因，是一種公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法，各種數(shù)據(jù)容易比較、對(duì)照，所以，至今仍是標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)測定方法。

一個(gè)嚴(yán)重的困擾是，凱氏定氮法測定的是所有含氮物質(zhì)的總量。在已知含有其他含氮化合物的時(shí)候必須測定非蛋白質(zhì)類含氮化合物的量加以扣除，所以，測定乳制品中非蛋白質(zhì)的含氮物質(zhì)含量是十分必要的。但是，當(dāng)一個(gè)非自然物質(zhì)含有的非蛋白質(zhì)類含氮化合物不明確的情況下，就無法扣除，測定方法就產(chǎn)生誤差。特別是當(dāng)產(chǎn)品中非法地加入尿素、三聚氰胺等含氮的物質(zhì)時(shí)，均可被消化、測定，并無法扣除，即使現(xiàn)在已經(jīng)研究了測定尿素、三聚氰胺的方法，但是，不能排除不法分子用其他非蛋白質(zhì)類含氮化合物冒充作假。現(xiàn)在，一般通過色譜法等方法檢測摻假的成分，但如果加入其它的高含氮的物質(zhì)，則需要另外加以研究，檢測方法將始終處于落后被動(dòng)的局面。并且色譜法測定各種摻假物質(zhì)，必須已知，且要分別測定，十分復(fù)雜。鑒于以上原因，必須尋找一種簡便測定乳制品中非蛋白質(zhì)的含氮物質(zhì)含量的方法。

發(fā)明內(nèi)容

常用的分析蛋白質(zhì)的光譜法包括：紫外光譜法、雙縮脲法、Folin酚法、BCA法、考馬斯亮蘭法等。

紫外光譜法是直接利用蛋白質(zhì)在280nm的吸收進(jìn)行測定，該法簡便，使用的儀器比較普及，設(shè)備價(jià)格不高。

雙縮脲法是利用蛋白質(zhì)中的肽鍵和堿性硫酸銅中的銅離子形成紫色絡(luò)合物，從而進(jìn)行定量。該法選擇性和準(zhǔn)確度好，精密度好；呈色穩(wěn)定性好，試劑單一，方法簡便。

Folin酚法是雙縮脲反應(yīng)的發(fā)展，它結(jié)合了雙縮脲反應(yīng)法中銅鹽反應(yīng)與Folin試劑反應(yīng)的特點(diǎn)，首先在堿性溶液中形成銅與蛋白質(zhì)復(fù)合物，然后該復(fù)合物通過芳香族氨基酸殘基、酪氨酸和色氨酸殘基的迅速反應(yīng)及肽鏈或極性側(cè)鏈或兩者的銅絡(luò)合物較慢的反應(yīng)，而把磷鉬酸、磷鎢酸色團(tuán)還原成深藍(lán)色，在750nm處測定光吸收值。此顏色反應(yīng)和蛋白質(zhì)含量在一定范圍內(nèi)成線性關(guān)系。該法靈敏度較高。

BCA法的原理是在堿性溶液中，蛋白質(zhì)將二價(jià)銅還原成一價(jià)銅，后者與測定試劑中BCA[bicin--choninic?acid](金雞寧)生成一個(gè)在562nm處具有最大光吸收的紫色復(fù)合物。復(fù)合物的光吸收強(qiáng)度與蛋白質(zhì)濃度正比。BCA法操作簡單，靈敏度與Folin一酚法相似，試劑十分穩(wěn)定，因此對(duì)時(shí)間控制不需那么嚴(yán)格。顯色后，1h內(nèi)吸光度值無變化。抗試劑干擾的能力強(qiáng)。

考馬斯亮蘭是利用G-250(一種染料)和蛋白質(zhì)結(jié)合，蘭色加深，測定595nm處吸光度進(jìn)行定量。該法靈敏度高，快速簡便，干擾少。