[發明專利]一種波塞鏈霉菌或天藍淡紅鏈霉菌發酵生產柔紅霉素的培養基及發酵方法

有效

• 申請號: 201310575569.6
• 申請日: 2013-11-18
• 公開（公告）號: CN103642881A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 任勇;王義;奇乃;董媛;李小萍
• 申請（專利權）人: 寧夏泰瑞制藥股份有限公司
• 主分類號: C12P19/56
• 分類號: C12P19/56;C12R1/465
• 代理公司: 寧夏專利服務中心 64100
• 代理人: 徐淑芬

技術領域

本發明屬于發酵技術領域，特別是涉及一種波塞鏈霉菌或天藍淡紅鏈霉菌發酵生產柔紅霉素的培養基及發酵方法。

背景技術

柔紅霉素是波塞鏈霉菌或天藍淡紅鏈霉菌的次級代謝產物，其成品主要作為一種臨床一線抗癌藥物，被廣泛應用于腫瘤的臨床治療。

目前，國內部分企業采用傳統工藝配方、三級發酵模式生產柔紅霉素，其碳源主要是淀粉、葡萄糖，氮源主要是麩皮、蛋白粉等，存在的問題主要是：

1）?采用培養基配方不同，碳源與氮源的配伍比例的差別，柔紅霉素的發酵單位一般在1～3g/L，導致發酵單位不穩定。

2）?柔紅霉素發酵周期較長，發酵周期平均在150h。

3）?綜合以上因素，導致能耗較高，柔紅霉素的發酵成本高，缺乏市場競爭力。

發明內容

本發明目的就在于克服上述現有技術的缺陷，提供一種有效提高發酵單位，縮短發酵周期，同時最大限度的降低生產成本，且原輔料來源不受環境影響，保證其供應充足，實現柔紅霉素穩定、高效地生產的波塞鏈霉菌或天藍淡紅鏈霉菌發酵生產柔紅霉素的培養基。

本發明的另一目的是提供利用上述培養基生產柔紅霉素的發酵方法。

為實現上述目的所采取的技術方案為：

????一種波塞鏈霉菌或天藍淡紅鏈霉菌發酵生產柔紅霉素的培養基，包括一級種子培養基、二級種子培養基和發酵培養基，其特征在于所述一級種子培養基的組成為：豆油或玉米油13～17ml/L、配方糖蜜15～19g/L、甘油4～7ml/L、蚯蚓粉10～15g/L、蛋白胨3～6g/L、輕質碳酸鈣2～5g/L、硫酸銨3～6g/L；

所述二級種子培養基的組成為：豆油或玉米油16～20ml/L、配方糖蜜22～28g/L、甘油8～10ml/L、蚯蚓粉14～20g/L、蛋白胨6～10g/L、磷酸二氫鉀0.4～0.7g/L、輕質碳酸鈣4～7g/L、硫酸銨4～8g/L、氯化鈉4～6g/L、氯化鉀6～10g/L；

所述發酵培養基的組成為：豆油或玉米油20～25ml/L、配方糖蜜30～35g/L、甘油12～16ml/L、蚯蚓粉20～24g/L、蛋白胨10～16g/L、磷酸二氫鉀0.6～0.9g/L、輕質碳酸鈣6～8g/L、硫酸銨5～10g/L、氯化鈉4～6g/L、氯化鉀6～10g/L、硫酸鎂6～9g/L、氯化鐵0.2～0.6g/L、聚乙二胺0.01～0.03g/L。

????所述配方糖蜜的組成為：生物素含量為0.07～0.09%、泛酸含量為0.02～0.05%、核黃素含量為0.04～0.07%、蔗糖轉化酶0.01～0.02%，其余為甘蔗糖蜜或甜菜糖蜜。

一種利用上述培養基發酵生產柔紅霉素的發酵方法，其特征在于其工藝步驟為：首先將已經培養好的波塞鏈霉菌或天藍淡紅鏈霉菌母瓶發酵液接入一級種子培養基中進行一級種子培養，至菌體濃度20～25%、pH值5～7、培養周期30～40h時轉移到二級種子培養基中進行二級種子培養，至菌體濃度30～35%、pH值5～7、培養周期40～50h時轉移到發酵培養基中進行發酵培養，至發酵單位≥3g/L、菌體濃度30～40%、發酵周期130～140h時終止發酵。

????所述一級種子培養基、二級種子培養基和發酵培養基在接種培養前首先進行滅菌處理，其中

滅菌后一級種子培養基的質量要求：氨基氮40～50mg/100ml、溶磷＞50ug/ml、總糖30～40g/100ml、pH5～7；

滅菌后二級種子培養基的質量要求：氨基氮40～50mg/100ml、溶磷＞50ug/ml、總糖30～40g/100ml、pH5～7；

滅菌后的發酵培養基的質量要求：氨基氮50～60mg/100ml、溶磷＞60ug/ml、總糖40～50g/100ml、pH：5～6。

所述一級種子培養條件為：

1）罐壓0.01～0.05MPa；

2）罐溫27～29℃；

3）空氣流量：發酵0～5h，空氣流量控制在20～30m³/h；6h～移種：50～80m³/h；

4）攪拌轉速80～100r/min；

5）pH5～7。

所述二級種子培養條件為：

1）罐壓0.01～0.05MPa；

2）罐溫27～29℃；

3）空氣流量200～300m³/h；

4）攪拌轉速100～120r/min；

5）pH值5～7。