[發明專利]一種波塞鏈霉菌或天藍淡紅鏈霉菌發酵生產柔紅霉素的培養基及發酵方法

有效

• 申請號: 201310575569.6
• 申請日: 2013-11-18
• 公開（公告）號: CN103642881A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 任勇;王義;奇乃;董媛;李小萍
• 申請（專利權）人: 寧夏泰瑞制藥股份有限公司
• 主分類號: C12P19/56
• 分類號: C12P19/56;C12R1/465
• 代理公司: 寧夏專利服務中心 64100
• 代理人: 徐淑芬

1.一種波塞鏈霉菌或天藍淡紅鏈霉菌發酵生產柔紅霉素的培養基，包括一級種子培養基、二級種子培養基和發酵培養基，其特征在于所述一級種子培養基的組成為：豆油或玉米油13～17ml/L、配方糖蜜15～19g/L、甘油4～7ml/L、蚯蚓粉10～15g/L、蛋白胨3～6g/L、輕質碳酸鈣2～5g/L、硫酸銨3～6g/L；

所述二級種子培養基的組成為：豆油或玉米油16～20ml/L、配方糖蜜22～28g/L、甘油8～10ml/L、蚯蚓粉14～20g/L、蛋白胨6～10g/L、磷酸二氫鉀0.4～0.7g/L、輕質碳酸鈣4～7g/L、硫酸銨4～8g/L、氯化鈉4～6g/L、氯化鉀6～10g/L；

所述發酵培養基的組成為：豆油或玉米油20～25ml/L、配方糖蜜30～35g/L、甘油12～16ml/L、蚯蚓粉20～24g/L、蛋白胨10～16g/L、磷酸二氫鉀0.6～0.9g/L、輕質碳酸鈣6～8g/L、硫酸銨5～10g/L、氯化鈉4～6g/L、氯化鉀6～10g/L、硫酸鎂6～9g/L、氯化鐵0.2～0.6g/L、聚乙二胺0.01～0.03g/L。

2.按照權利要求1所述的培養基，其特征在于所述配方糖蜜的組成為：生物素含量為0.07～0.09%、泛酸含量為0.02～0.05%、核黃素含量為0.04～0.07%、蔗糖轉化酶0.01～0.02%，其余為甘蔗糖蜜或甜菜糖蜜。

3.一種利用權利要求1或2所述的培養基發酵生產柔紅霉素的發酵方法，其特征在于其工藝步驟為：首先將已經培養好的波塞鏈霉菌或天藍淡紅鏈霉菌母瓶發酵液接入一級種子培養基中進行一級種子培養，至菌體濃度20～25%、pH值5～7、培養周期30～40h時轉移到二級種子培養基中進行二級種子培養，至菌體濃度30～35%、pH值5～7、培養周期40～50h時轉移到發酵培養基中進行發酵培養，至發酵單位≥3g/L、菌體濃度30～40%、發酵周期130～140h時終止發酵。

4.按照權利要求3所述的發酵方法，其特征在于所述一級種子培養基、二級種子培養基和發酵培養基在接種培養前首先進行滅菌處理，其中

滅菌后一級種子培養基的質量要求：氨基氮40～50mg/100ml、溶磷＞50ug/ml、總糖30～40g/100ml、pH5～7；

滅菌后二級種子培養基的質量要求：氨基氮40～50mg/100ml、溶磷＞50ug/ml、總糖30～40g/100ml、pH5～7；

滅菌后的發酵培養基的質量要求：氨基氮50～60mg/100ml、溶磷＞60ug/ml、總糖40～50g/100ml、pH：5～6。

5.?按照權利要求3所述的發酵方法，其特征在于所述一級種子培養條件為：

1）罐壓0.01～0.05MPa；

2）罐溫27～29℃；

3）空氣流量：發酵0～5h，空氣流量控制在20～30m³/h；6h～移種：50～80m³/h；

4）攪拌轉速80～100r/min；

5）pH5～7。

6.?按照權利要求3所述的發酵方法，其特征在于所述二級種子培養條件為：

1）罐壓0.01～0.05MPa；

2）罐溫27～29℃；

3）空氣流量200～300m³/h；

4）攪拌轉速100～120r/min；

5）pH值5～7。

7.?按照權利要求3所述的發酵方法，其特征在于所述發酵培養條件為：

?a?發酵培養初始pH：5～6，發酵過程中pH4～6；

?b?變溫培養控制：

0～10h：培養溫度25～26℃；

11～100h：27～28℃；

101h～放罐：24～25℃；

?c?攪拌和溶氧控制：

0～20h：攪拌轉速控制在100～150r/min，溶氧濃度不得低于60%；

21～100h：攪拌轉速控制在200～250r/min，溶氧濃度控制在20～40%；

101h～放罐：攪拌轉速控制在150～200r/min，溶氧濃度控制在30%以上；

?d?罐壓：罐壓控制在0.04～0.06MPa。

8.?按照權利要求3所述的發酵方法，其特征在于在發酵過程中進行補料，包括補油、補水、補酸或堿和補氮源，其中

??a?補油控制：采用流加法補豆油或玉米油，

發酵前30h不用進行補油，

31h～100h：脂肪含量低于3%時，補入油；脂肪含量超過3%，則停止補油，

101h至發酵結束：脂肪含量低于1%時，補入油；脂肪含量超過1.5%，則停止補油；

b補水：

發酵前20h不用進行補水，

21h～80h：當發酵液菌體濃度＞50%，補入已滅菌的飲用水，控制菌體濃度40～50%，

81h至發酵結束：當發酵液菌體濃度＞40%，采用流加法補水，控制菌體濃度30～40%；

c補酸或堿：

發酵前20h，pH不進行控制，

發酵21h至發酵結束：如果pH＜5，選擇5～10%的氫氧化鈉溶液調節pH至5～6，如果pH＞6，選擇20～30%的硫酸銨溶液調節pH至5～6；

d補入氮源：在發酵周期分別在30h、60h、80h和100h時補入氮源，其補入量為發酵液體積的1～1.5%，所述氮源為10%的蛋白胨和15%的蚯蚓粉的混合水溶液。